Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Субклеточные фракции


Субклеточные фракции используются в исследовании метаболизма лекарственного средства для решения различных вопросов. Наряду с системами экспрессируемых ферментов, субклеточные фракции приготовленные из тканей (печень и кишечник), в том числе цитозоле и S9 (фракция супернатанта, полученная из органа (печень), как правило, гомогенат, центрифугируется при 9000 оборотах в течение 20 минут в приемлемой среде; эта фракция содержит цитозоль и микросомы), которые участвуют в лекарственном метаболизме. S9 содержит группу ферментов, способных метаболизировать лекарственные средства и которые отвечают за конкретные маршруты метаболизма препарата.


Фракция S9 содержит как цитозоль, так и микросомы. Она представляет собой почти полную коллекцию ферментов принимающих участие в метаболизме лекарственных средств. Однако присутствие столь многочисленных ферментов может ослаблять активность нужного фермента. Микросомальные фракции содержат мембраносвязанные цитохромы и конъюгированные ферменты, такие как УДФ-глюкуронилтрансфераза, ответственные за метаболизм более 90% продаваемых лекарств. Это наиболее часто используемая ферментная система.

Цитозоль часто используется для проведения механистических исследований, для идентификации растворимых ферментов, участвующих в частности, в метаболизме, таких как N-ацетил-трансферазы, для определения глутатион трансферазы, альдегидоксидазы и ксантиноксидазы. Например региоселективный сульфатион фитоэстрогена "Диадезина" и "Генистеина" исследовались с использованием цитозоли печени и очищенной, рекомбинантной изоформы сульфотрансферазы человека. Кроме того, цитозольные анализы используются для дополнительного микросомального исследования оценки пути метаболизма лекарственного препарата.


Одно из преимуществ использования S9 фракции над микросомами является его способность захватить дополнительный метаболизм, опосредованный таким ферментом как сульфатион. Кроме того, S9 обеспечивает экономию и проще в обращении по сравнению с первичной инкубацией гепатоцитов, которая также обеспечивает полный набор ферментов.

При работе с субклеточной фракцией, важно помнить, что ко-факторы, которые опосредуют либо окислительный метаболизм (например, NADPH) либо реакции сопряжения (например, дифосфатуридин глюкуроновой кислоты и S-аденозилметионин) теряются в процессе выделения этих фракций. Таким образом, необходимо дополнить субклеточные фракции этими кофакторами для инициации различных ферментативных реакций. Включая или исключая определенные сопутствующие факторы, можно точно определить участие некоторых метаболических путей для исследуемого соединения.

Микросомы - это наиболее широко используемые субклеточные фракции для исследований метаболизма лекарственных средств. Их преимущества - низкая стоимость и простота в обращении. Микросомальных испытания являются анализами по умолчанию для изучения метаболизма и исследований лекарственного взаимодействия на стадии разработки лекарств. Одно из применений микросомальных испытаний заключается в определении действительного клиренса, данный параметр является полезным  для содействия процессу отбора стабильных соединений и для создания корреляции In Vitro между животными и людьми. Используя микросомы из различных тканей, можно оценить внепеченочный метаболизм и в дальнейшем укрепить прогноз In Vitro. Микросомальные испытания также наиболее предпочтительны для определения потенциала лекарственного взаимодействия.