Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Культуры клеток


Культуры клеток как Биологическая, химическая или физическая система в отдельности или в комбинации, используемая в исследованиях.тест-система в доклинических исследованиях

Введение

В системе доклинического исследования лекарственных препаратов первым этапом является оценка токсичности соединения для культуры клеток и лабораторных животных.

Преимуществами такого исследования являются: способность оценить большое количество веществ в различных дозировках за короткий срок, обладает высокой воспроизводимостью, высокой чувствительностью, в исследовании in vitro возможно использование клеток человека, что позволяет свести к минимуму возможность получения негативных результатов при клинических испытаниях, так как положительные результаты, полученные на материале животных, не всегда адекватно экстраполируются на организм человека, а также использование клеточных структур позволяет значительно лучше прояснить возможный механизм действия исследуемого вещества.

Как правило, в процессе исследования токсичности соединений изучают влияние различных концентраций препарата на морфологию клеток. Однако в связи с тем, что различные типы и линии клеток неодинаково чувствительны к воздействию лекарственных препаратов, оценку их эффективности нередко проводят с использованием нескольких типов и линий клеток. Использование нескольких культур клеток позволяет более достоверно осуществлять оценку токсичности существующих и новых лекарственных соединений.

Безусловно, эксперименты на животных крайне важны для сохранения здоровья человека, но эти исследования являются трудоемкими и дорогостоящими, а также они травмируют подопытных животных и приводят к их гибели. Поэтому сегодня вполне обоснованны усилия ученых, направленные на максимальное сокращение количества животных и замену их альтернативными моделями и тест-системами в условиях in vitro.

Всемирная организация здравоохранения, международное медико-биологическое общество не только одобряют, но и настоятельно рекомендуют и поддерживают использование альтернативных моделей и методов. Эксперименты в условиях in vitro становятся повседневной практикой в деятельности научно-исследовательских институтов экологического и гигиенического профиля, органов, контролирующих состояние окружающей среды.

Тест системы

Современные научные технологии создают широкие возможности для использования в токсикологических исследованиях альтернативных методов на клеточном и молекулярном уровнях, которые заменяют классические парадигмы определения опасности и оценки риска химических веществ. Показано, что они являются достаточно точными, простыми, быстрыми в постановке, перспективными, универсальными, практически ценными, селективными и экономически рентабельными.

Например, для исследования цитотоксичности ксенобиотиков на культуре клеток рекомендованы следующие тесты:

• определение количества жизнеспособных клеток с использованием трипанового синего;

• определение содержания общего белка, как показателя прироста клеточной массы (тест с сульфородамином В), который также может быть показателем клеточной пролиферации;

• определение изменений активности дыхательных ферментов в тесте с метилтетразолием (МТТ);

• оценка лизосомальной активности и интенсивности процессов активного мембранного переноса –по поглощению красителя нейтрального красного;

• оценка степени повреждения цитоплазматической мембраны – по выходу в среду инкубации фермента лактатдегидрогеназы (ЛДГ).

Кроме выше перечисленных методов довольно часто применяются такие тесты:

• определение нарушения регуляции ионного состава (рН среды);

• оценка нарушения процессов метаболизма (определение активности глутатион-S-трансферазы);

• определения содержания АТФ в клетках и инкубационной среде;

• оценка морфологических изменений клеток.

По результатам вышеуказанных тестов определяют концентрацию исследуемого вещества, которая вызывает 50-процентное снижение того или иного показателя по отношению к контролю и обозначается как IC50, LC50, EC50.

ІС50 (Inhibitory concentration) –концентрация подавляющая рост 50% клеток в культуре. LC50 (Letal concentration) – концентрация вещества, вызывающая гибель 50% клеток. ЕC50 (Effective concentration) – концентрация, вызывающая снижение функции у 50% клеток.

На сегодня уже имеются определенные достижения использования культуры клеток при изучении хронической токсичности in vitro. При этом продолжительность экспозиции исследуемого вещества как минимум, длится пять суток. Инкубация с препаратом может быть как непрерывной, так и в виде нескольких повторных его введений в культуральную среду.

Список литературы

1. Дмитруха Н.Н., Культура клеток как In vitro модель в токсикологических исследованиях

2. Хабриев Р.У., Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Второе изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.