Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Бактерии


Бактериологические тест-системы в доклинических иследованиях

Цель

Целью является унификация исследований по оценке различных эффектов, выполненных при помощи бактериологических тест-систем.

Введение

Бактериальные тест-системы могут применяться для:

- определения острой и хронической токсичности,

- определения чувствительности возбудителя,

- изучения химиотерапевтической эффективности антибиотиков,

- моделирования инфекционного состояния у животных,

- изучения генотоксичности (тест Эймса) и т.д.

В эксперименте должны использоваться бактериальные культуры со здоровым ростом и высоким титром жизнеспособных бактерий. Бактериальные культуры должны быть выращены до конца экспоненциальной или ранней стационарной фазы роста (приблизительно 10клеток/мл). Необходимо отметить что культуры в конце стационарной фазы не должны быть использованы.

Микроорганизмы в силу своей убиквитарности и высокой биологической пластичности быстро реагируют на изменение окружающей среды. В связи с этим они могут быть использованы не только для оценки токсичности химических веществ, но и как индикаторы качества окружающей среды. На простых моделях (E.Coli) исследуются подвижность, хемотаксис, метаболическая активность, интенсивность размножения этих биологических объектов, как показатель степени токсичности различных веществ.

Для создания модели инфекционного заболевания у животного необходимо использовать тот путь инфицирования, который соответствует естественному пути заражения человека данной инфекцией. При отсутствии у животного чувствительности к патогенному возбудителю, используют другие пути заражения с учетом тяжести течения инфекции, при этом очень важен выбор сроков наблюдения за инфицированными животными.

Рекомендуемый набор культур для воспроизведения инфекции включает: стафилококки (плазмокоагулирующий и коагулазонегативный штаммы, антибиотикочувствительные и антибиотикоустойчивые с различным набором маркеров резистентности, в том числе метициллинрезистентные), стрептококки (гемолитический и зеленящий), пневмококки (чувствительные к бензилпенициллину и пенициллинрезистентные); различные виды энтеробактерий антибиотикочувствительные и множественноустойчивые (эшерихии, клебсиеллы, протеи, шигеллы, сальмонеллы), псевдомонады и другие неферментирующие грамотрицательные бактерии, возбудители газовой гангрены, дрожжеподобные грибы Candida и др.

Изучение острой и хронической токсичности штаммов

Изучение острой токсичности

При   изучении   острой  токсичности  однократно  вводят  несколькими способами  (внутривенно,  внутрибрюшинно,  перорально)  3 или 4 разные дозы испытуемых   культур  штаммов  или  препаратов  для  определения  LD 50 или максимально  переносимой  дозы. Контрольной группе животных тем же способом вводят  0,9%-ный  раствор  натрия  хлорида.  Из  той  же  группы  оставляют интактных    животных    (2-ая    контрольная   группа).   Внутривенные   и внутрибрюшинные  введения  максимально  переносимых  доз  позволяют выявить органы-мишени  для  испытуемого пробиотика, характер и степень выраженности морфологических  изменений  в  них.  Сравнение  параметров  токсичности при разных  путях  введения  может дать представление о сходстве или различии в механизмах  токсического  действия  испытуемых  штаммов  или  препаратов  и причинах летального исхода у животных.

Максимальные объемы жидкости должны вводиться мышам в течение 5 секунд, крысам и морским свинкам - в течение 10 секунд, кроликам - в течение 20 секунд.

Общая продолжительность наблюдений за животными должна составлять не менее 7 суток. Ежедневной регистрации подлежат гибель животных, изменение массы тела, а также наличие или отсутствие возможных клинических симптомов интоксикации, в т.ч. нарушение координации движения, наличие судорог, их характер, а также состояние волосяного и кожного покрова, окраска слизистых оболочек, положение хвоста. Через 24 ч и 7 суток осуществляют взятие материала от внутренних органов выживших животных, не менее чем по 5 животных соответственно. Обязательному исследованию подлежат все животные, павшие в течение срока наблюдения. Перед забором внутренних органов их осматривают. Макроскопические изменения каждого органа фиксируют в журнале. Допускается проведение гистологического исследования органов одного вида животных, оказавшегося более чувствительным к токсическому воздействию препарата. Во всех экспериментах, предусматривающих выполнение патоморфологических исследований, используют равное количество контрольных (после введения 0,9%-ного хлорида натрия) и интактных животных .

Определение хронической токсичности

Общие положения

Целью хронических токсикологических экспериментов является характеристика степени повреждающего действия исследуемых штаммов или препаратов при их длительном введении, выявление наиболее чувствительных органов и систем организма, а также для определения степени обратимости вызываемых ими повреждений.

Хроническую Мера вредного воздействия исследуемого материала на организм в условиях однократного или многократного введения.токсичность определяют не менее чем на двух видах животных (или двух линиях одного вида). Обязательным путем является пероральный способ введения независимо от лекарственной формы готового препарата.

Препарат вводят не менее чем 20 животным один раз в сутки в дозе, эквивалентной предлагаемой для человека, при пересчете на 1 кг массы. Перерыв в курсе введения не допускается. Наблюдение за животными проводят в течение периода введения препарата и последующих 7 суток. Ежедневной регистрации подлежат гибель животных, изменение массы тела, а также наличие или отсутствие возможных клинических симптомов интоксикации - таких как нарушение координации движения, наличие судорог и их характер, а также состояние волосяного и кожного покрова, окраска слизистых оболочек, положение хвоста. Для проведения гистологического исследования на 1 и 7 сутки после последнего введения препарата забивают по 5 животных соответственно. Гистологическому исследованию подвергают также органы всех животных, павших в течение периода наблюдения.

Допускается проведение гистологического исследования органов одного вида или линии животных, оказавшихся более чувствительными к токсическому действию препарата.

Список литературы

Каркищенко Н.Н., Грачева С.В., Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских исследованиях, М.:Профиль–2С, 2010 241 с.

Миронов А.Н., Бунатян Н.Д. и др. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств.

Хабриев Р.У., Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Второе изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.

МУК 4.2.2602-10 с.36