Оценка фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов
Оценка фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов
Для фагоцитоза можно использовать различные частицы (меченные эритроциты, дрожжевые тельца, частицы латекса и др). Здесь приводится описание фагоцитоза частиц коллоидной туши.
По окончании введения мышам исследуемого препарата через 24 часа оценивают у них фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов по интенсивности захвата ими частиц туши, введённой животным внутрибрюшинно в виде 0,05% суспензии в объёме 2 мл. Через 10 мин брюшную полость промывают 5 мл изотонического раствора хлорида натрия. Полученные таким образом клетки перитонеального экссудата (КПЭ) трижды отмывают, ресуспендируют в 1-2 мл физиологического раствора, подсчитывают концентрацию ЯСК и процент фагоцитирующих клеток. Далее клетки осаждают центрифугированием, супернатант удаляют, а осадок КПЭ лизируют дистиллированной водой. Лизаты КПЭ затем помещают в плоскодонные планшеты и определяют с помощью спектрофотометра "Multiscan MCC 340" при длине волны равной 620 нм оптическую плотность, отражающую количество туши, поглощённой перитонеальными фагоцитами. Результаты выражают в условных единицах, отражающих оптическую плотность лизата КПЭ, соотнесенную с количеством фагоцитирующих клеток.
Исследования позволяют оценить:
- концентрацию и количество ядросодержащих клеток в ПЭ;
- процент и количество фагоцитирующих клеток в ПЭ;
- суммарное количество туши , поглощенной КПЭ;
- количество туши , поглощенной одним фагоцитом (фагоцитарный индекс).
Список литературы:
Хаитов Р.М., Атауллаханов Р.И., Иванова А.С. и др. Методические указания по оценке иммунотоксического действия фармакологических веществ. — М., 2000.
