Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Оценка активности нейтрофилов в тесте хемилюминесценции

Оценка активности нейтрофилов в тесте хемилюминесценции


В качестве источника нейтрофилов используют пуллированную венозную кровь мышей , взятую в ЭДТА (1,5 мг/мл). Образцы крови 0,5 – 1 мл лизируют добавлением 12 – 15 мл лизирующего раствора (NH4Cl 8.26 г/л и NaHCO3  1 г/л, рН 7,2) .После 7 минутной экспозиции при комнатной температуре и центрифугировании (9 минут при 200 g), гемолизат удаляется, осевшие клетки ресуспендируют в 1 мл буферного раствора (pH 7,2), приготовленного из раствора Хенкса (без фенолового красного), дополненного 5 μM глюкозы, 10 μM HEPES-буфера, 0.62 х 10-3  М люминола (Sigma Chemical Co.). По 100-50 мкл суспензии помещают в пробирки для хемилюминесценции , вносят 0,5 мл упомянутого буферного раствора с добавлением люминола и помещают в ячейки хемилюминометра. Для активации хемилюминесцентной реакции нейтрофильных гранулоцитов используют опсонизированный зимозан (Sigma Chemical Co.). Образцы клеток инкубируют в течение 15 мин, затем добавляют 10-20 мкл опсонизированного зимозана (10 мг/мл) и регистрируют уровень и кинетику хемилюминесценции в течение 30 минут. Интенсивность хемилюминесцентного ответа оценивают по максимальному значению на кинетической кривой. Среднее значение интенсивности хемилюминесценции определяют по данным не меньше трех идентичных измерений. Результаты оценивают количественно по числу импульсов в минуту на 1 мкл крови и на количество нейтрофилов в 1 мкл .

Аналогичные исследования можно проводить , используя в качестве источника фагоцитов клетки перитонеального экссудата и спленоциты.

Список литературы:

Хаитов Р.М., Атауллаханов Р.И., Иванова А.С. и др. Методические указания по оценке иммунотоксического действия фармакологических веществ. — М., 2000.