Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Реакция конденсации с ортофталевым альдегидом (ОФА)

Реакция конденсации с ортофталевым альдегидом (ОФА)


В четыре опытные пробирки (2 - с надосадочной жидкостью и 2 - с тучными клетками, лизированными трилоном) и контрольные 3 и 4 добавляют по 0,2 мл 3М NaOH и 0,1-0,2 мл ОФА). Обязательно встряхивают каждую пробирку сразу же после добавления ОФА. Через 4 минуты добавляют 0,15 мл 1,5% H3PO4 (среда должна быть кислая). Флюориметрия - через 10 мин. после стабилизации раствора ортофосфорной кислотой. Измеряют флюоресценцию на спектрофлюориметре Хитачи HPp-4. Сначала измеряют величину свечения контрольных проб, затем опытные образцы.

Процент выхода гистамина рассчитывают по формуле:

OFA

где А — процент выделившегося гистамина из ТК (надосадочная жидкость); В — процент гистамина, оставшегося в ТК (осадок ТК).

Определение рабочей зоны тест-препарата осуществляется опытным путем. Обычно это уже 10-4–10-6 молей. К 900 мкл суспензии ТК в концентрации 106 добавляют 100 мкл исследуемого вещества (инкубируют 10–15 мин в термостате при 37 °С). Затем подсчи-тывают живые клетки по исключению трипанового синего (каплю клеточной суспензиипри комнатной температуре смешивают с каплей 0,1 % раствора трипанового синего и через 1–3 мин подсчитывают число погибших, т. е. окрашенных клеток), количество по-гибших клеток не должно превышать 5 %.

Ставится контроль на отсутствие спонтанной дегрануляции: ТК + трипановый синий — мертвые клетки ≤ 5 %.

Список литературы


1. Ovary Z. Immediate reaction in the skin of experimental animals provoked by antibody antigen interactions// Progr. Allergy. — 1958. — Vol. 5. — P. 459.


2. Оценка аллергизирующих свойств фармакологических средств. Методические рекомендации N 98/300.