Регламент

Известно, что интенсивность реакций гиперчувствительности замедленного типа (ГЗГ) к химическим соединениям и их длительность зависят от сроков формирования и сочетанного действия различных субпопуляций Т-супрессоров, подавляющих ГЗТ. Поэтому при индукции ГЗТ путем введения мышам химических аллергенов в полном адъюванте Фрейнда (ПАФ), при котором не происходит формирования Т-супрессоров, возможно усиление кожных аллергических реакций и выявление аллергенных свойств даже слабых химических аллергенов. Опыты проводят на не линейных мышах, массой 18-20 г. Мышей сенсибилизируют однократно, внутрикожно, в основание хвоста, 60 мкл эмульсии препарата в ПАФ, дозой эквивалентной 10 Мм раствору в ПАФ в соотношении 1:1. Для приготовления такой эмульсии используют раствор Хенкса pH 7,5.

Для выявления сенсибилизации через 5 суток мышам в подушечку задней лапы вводят 40 мкл 10 мМ раствора тест-препарата в растворе Хенкса. Через 6-22-24 часа после тестирования измеряют величину отека с помощью инженерного микрометра МК-0-25. Разница в толщине обеих лапок характеризует величину отека, по которой можно судить об интенсивности реакции ГЗТ.

Контрольных животных сенсибилизируют эмульсией ПАФ с раствором Хенкса по той же схеме, что в опыте. В каждой группе должно быть не менее 10 животных. В том случае, если тест-препарат становится аллергеном в процессе метаболизма, например пенициллин, тестирование проводят максимальной концентрацией вещества, эмульгированного в неполном адъюванте Фрейнда (НАФ). Учет реакции проводят через 48-72 часа.

Приготовление полного адъюванта Фрейнда (ПАФ):

- 1 мл ланолина;

- 3 мл вазелинового масла;

- 5 мг убитой прогреванием вакцины БЦЖ;

- 50 мкл твина-20;

- 0,5 мл дистиллированной воды.

Неполный адъювант Фрейнда (НАФ): те же самые компоненты, за исключением убитой прогреванием вакцины БЦЖ.

Список литературы

1. Черноусов А.Л. Гигиена труда и профессиональные заболевания, N 6, 1987, с. 45-48.

2. Оценка аллергизирующих свойств фармакологических средств. Методические рекомендации N 98/300