Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Непрямая реакция дегрануляции тучных клеток (РДТК)

Непрямая реакция дегрануляции тучных клеток (РДТК)


Постановку РДТК осуществляли следующим образом. Для получения тучных клеток крыс животных забивают кровопусканием, вводят внутрибрюшинно 5-8 мл подогретого до 37 град. C раствора Тироле без глюкозы, после легкого массажа в течение 1-1,5 мин. брюшной стенки, делают ножницами до средней линии разрез, длиной 1,5-2 см, переворачивают тушку разрезом вниз и собирают экссудат, стекающий с петель кишечника, в смоченную гепарином пробирку. Препараты готовят на обезжиренных предметных стеклах, окрашенных 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного и высушенных при комнатной температуре.

К 0,03 мл взвеси тучных клеток добавляют 0,03 мл сыворотки опытного животного и 0,03 мл специфического аллергена (например, исследуемого лекарственного вещества).

Исследуемый препарат должен быть растворим в воде. Разведение препарата обычно готовят 1:100, или более, чтобы в контроле на антиген дегрануляция тучных клеток не превышала 5%. Далее препараты покрывают покровным стеклом, края которого смазывают вазелином, затем инкубируют 15 мин. в термостате при 37 град. C. Препараты микроскопируют под увеличением x 20.

Оценку результатов проводят дифференциальным способом учета, подсчитывают показатель дегрануляции тучных клеток (ПДТК) по формуле:

RDTK

где а, б, с, д - количество (среднее из трех повторений) дегранулированных клеток соответственно степени дегрануляции (слабо выраженной, умеренной, резкой и степени полностью дегранулированных клеток). В каждой камере подсчитывали 100 клеток. Реакцию считали положительной, если ПДТК превышал 0,2. При постановке реакции необходимо учитывать следующие контроли: перитонеальной взвеси тучных клеток, аллергена и сыворотки. В контрольных пробах до нужного объема доводят растворителем (фосфатный буфер pH - 7,2). Основная методическая ошибка: отсутствие подбора оптимальных доз антигена и исследуемой сыворотки, нарушение pH среды.

Список литературы


1. Алексеева О.Г., Дуева Л.А. Аллергия к промышленным химическим соединениям, М., "Медицина", 1978, с. 271.


2. Радунская С.Ф Тест непрямой дегрануляции ТК крыс, как метод оценки специфической активности инфекционных аллергенов. Автореф. дисс. канд. биол. наук. Москва, 1982. стр. 16


3. Оценка аллергизирующих свойств фармакологических средств. Методические рекомендации N 98/300.