Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Метод ШОР

Метод ШОРа


Работа выполняется на интактных крысах популяции Wistar (1–2 животных для исследования одного вещества). После декапитации животному внутрибрюшинно вводят 5–10 мл подогретого до 25 °С раствора Хенкса, аккуратно массируют живот в течение 90 с. Вскрывают брюшную полость по средней линии и отсасывают взвесь ТК пипеткой или сливают в пробирки. Эритроцитов не должно быть. Тучные клетки осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000–1500 об/мин и готовят в растворе Хенкса 10 мл взвеси ТК с концентрацией 105 кл/мл. Для подсчета клеток используют 0,1 % раствор нейтрального красного.


Выявление гистаминолибераторного действия исследуемого вещества:


а) в предварительном эксперименте подбирают нетоксическую дозу фармакологического вещества;


б) с целью инкубации с исследуемым веществом ТК разливают в 2 параллельные пробирки по 1 мл в указанной концентрации. К взвеси добавляют по 100 мкл тест-препарата в нетоксической для ТК концентрации. Пробирки слегка встряхивают и  инкубируют в течение 10 мин при температуре 37 °С. Для остановки процесса гистаминолиберации в пробирки добавляют по 1,5 мл охлажденного раствора Хенкса, центрифугируют 5–10 мин при 1000–1500 об/мин и надосадок сливают в чистые пробирки для определения выделившегося гистамина. К осадкам добавляют 0,1 мл 1% раствора трилона Х-100, выдерживают при комнатной температуре 5–7 мин, добавляют 2,5 мл раствора Хенкса.
В качестве контроля используют:


1-я пробирка — стандартный раствор гистамина (1 мкг/мл 100 % содержание гистамина);


2-я пробирка — раствор Хенкса (флюоресценции не должно быть);


3-я пробирка — 1 мл взвеси ТК в концентрации 105;


4-я пробирка — 1 мл рабочего раствора Хенкса.


3-я и 4-я пробирки ставятся для проверки чистоты реактивов. Исследуемое вещество оценивают на степень спонтанной флюоресценции или способность ее ингибиции.


Список литературы


1. Shore P.A., Burkhalter A., Coch V.U.J. A method for the fluorometric assay of histamine in tissues // J.Pharmacol.Exp. Ther. — 1959. — Vol. 127. — P. 182–186.


2.E.Khosrasi et al "Allergic conjunctivitis and uveitis models: Reappraisal with some marketed drugs", - Inflamm. Res. 44: 47-54 (1995).


3. Оценка аллергизирующих свойств фармакологических средств. Методические рекомендации N 98/300.