Метод ШОРа
Работа выполняется на интактных крысах популяции Wistar (1–2 животных для исследования одного вещества). После декапитации животному внутрибрюшинно вводят 5–10 мл подогретого до 25 °С раствора Хенкса, аккуратно массируют живот в течение 90 с. Вскрывают брюшную полость по средней линии и отсасывают взвесь ТК пипеткой или сливают в пробирки. Эритроцитов не должно быть. Тучные клетки осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000–1500 об/мин и готовят в растворе Хенкса 10 мл взвеси ТК с концентрацией 105 кл/мл. Для подсчета клеток используют 0,1 % раствор нейтрального красного.
Выявление гистаминолибераторного действия исследуемого вещества:
а) в предварительном эксперименте подбирают нетоксическую дозу фармакологического вещества;
б) с целью инкубации с исследуемым веществом ТК разливают в 2 параллельные пробирки по 1 мл в указанной концентрации. К взвеси добавляют по 100 мкл тест-препарата в нетоксической для ТК концентрации. Пробирки слегка встряхивают и инкубируют в течение 10 мин при температуре 37 °С. Для остановки процесса гистаминолиберации в пробирки добавляют по 1,5 мл охлажденного раствора Хенкса, центрифугируют 5–10 мин при 1000–1500 об/мин и надосадок сливают в чистые пробирки для определения выделившегося гистамина. К осадкам добавляют 0,1 мл 1% раствора трилона Х-100, выдерживают при комнатной температуре 5–7 мин, добавляют 2,5 мл раствора Хенкса.
В качестве контроля используют:
1-я пробирка — стандартный раствор гистамина (1 мкг/мл 100 % содержание гистамина);
2-я пробирка — раствор Хенкса (флюоресценции не должно быть);
3-я пробирка — 1 мл взвеси ТК в концентрации 105;
4-я пробирка — 1 мл рабочего раствора Хенкса.
3-я и 4-я пробирки ставятся для проверки чистоты реактивов. Исследуемое вещество оценивают на степень спонтанной флюоресценции или способность ее ингибиции.
Список литературы
1. Shore P.A., Burkhalter A., Coch V.U.J. A method for the fluorometric assay of histamine in tissues // J.Pharmacol.Exp. Ther. — 1959. — Vol. 127. — P. 182–186.
2.E.Khosrasi et al "Allergic conjunctivitis and uveitis models: Reappraisal with some marketed drugs", - Inflamm. Res. 44: 47-54 (1995).
3. Оценка аллергизирующих свойств фармакологических средств. Методические рекомендации N 98/300.
