Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Выработка условнорефлекторной реакции предпочтения места (УРПМ) у крыс и мышей

Выработка условнорефлекторной реакции предпочтения места (УРПМ) у крыс и мышей


Нейтральные обстановочные раздражители при сочетании с "награждающим" эффектом аддиктивных средств могут приобретать собственные "аттрактивные" свойства, на базе которых вырабатываются инструментальные реакции второго и более высоких порядков, которые подкрепляются этими условнорефлекторными раздражителями. Если эффект аддиктивного вещества испытывается животным в определенном месте, например в одной из камер двух- или многокамерной установки или участке "открытого поля", имеющем специфические дискриминативные стимульные свойства (тактильные, световые, обонятельные и т.п.), то животное предпочитает находится в этом месте, если ему предоставляется выбор. Условнорефлекторная реакция предпочтения места (УРПМ) получила широкое распространение при изучении аддиктивных средств с конца 70-х, начала 80-х гг. Если вещество проявляет противоположный (аверсивный) эффект, то вырабатывается условнорефлекторная реакция избегания места (УРИМ). Таким образом, условный рефлекс на место может иметь противоположную направленность (УРПМ или УРИМ) и отражать итоговое взаимодействие исследуемого вещества с мозговым субстратом мотивационных реакций. Выработка условного рефлекса на место является технически простым тестом доклинической оценки аддиктивного потенциала фармакологических средств, имеющим свои достоинства и недостатки (таблица 1).


Методика выработки УРПМ у крыс существует в двух модификациях: а) с исходным предпочтением животными одного из экспериментальных отсеков (biased procedure) и б) с исходно сбалансированным выбором отсеков экспериментальной камеры (unbiased procedure). При первом варианте метода легче получить четкую кривую зависимости "доза-эффект", однако при этом трудно исключить вклад антиаверсивных свойств исследуемого вещества в окончательный эффект обусловливания. При использовании второй модификации уверенность в определении избирательных "награждающих" (УРПМ) или аверсивных (УРИМ) эффектов препаратов выше. В настоящих методических рекомендациях рассматривается методика выработки УРПМ при исходно сбалансированном выборе отсеков экспериментальной камеры (unbiased procedure).


Материально-техническое обеспечение метода.


Экспериментальные животные - крысы-самцы массой 150-250 гр. Рекомендуется содержать животных при инвертированном режиме освещения (12 часовой цикл темнота/свет) для активации поведения во время экспериментов в темновой фазе. Эксперименты начинают примерно через час после начала темнового цикла. Предварительно формируются группы (не менее восьми в группе) для изучения эффекта каждой дозы препарата и растворителя.


Экспериментальная установка обычно состоит из 2 или более камер различной формы и размера, которые отличаются по текстуре пола, окраске стенок и т.п., что позволяет животным дифференцировать разные камеры. Важно, чтобы при свободном исследовании камер, в группе крыс не проявлялось предпочтения одной из них. Желательна автоматическая регистрация с помощью механических или оптических датчиков времени нахождения животных в отсеках установки и количества переходов.


Описание метода.


Протокол исследования предусматривает периоды обусловливания и тестирования. Период фармакологического обусловливания продолжается 4 дня. Каждый день проводят две сессии выработки условного рефлекса на место. Первая сессия является дифференцировочной. Перед помещением в один из отсеков (отсеки камеры разделены перегородкой) на 20-45 мин. (в зависимости от сроков действия препарата) животным вводят растворитель. Во время второй сессии вводят исследуемое соединение (в контрольной группе - растворитель) перед помещением животного в противоположный отсек на 20-45 минут. Размещение животных после инъекции в том или ином отсеке производят в случайном порядке таким образом, что половину группы размещают в данном отсеке после инъекции препарата, а другую половину - после введения растворителя. После каждого опыта камеры обрабатывают 3% раствором перекиси водорода.


Заключительное тестирование выработки условного рефлекса на место проводят через 72 часа после последнего обусловливания. Из камеры вынимается перегородка между отсеками и в течение 15 минут крысы свободно исследуют экспериментальную камеру.


Регистрируют время нахождения в отсеках и количество переходов из одного отсека в другой. Время, проводимое в отсеке, ассоциированном с действием препарата, сравнивают со временем нахождения в отсеке, ассоциированном с растворителем. Положительное значение разности двух величин указывает на выработку УРПМ, а отрицательное на УРИМ. В качестве альтернативного (квантового) показателя используют количество животных в группе с выработанной УРПМ или УРИМ. За критерий предпочтения условно принимается время нахождения в данном отсеке более 2/3 (более 600 сек) или, соответственно менее 1/3 (300 сек) от общего времени теста (900 сек). Этот критерий примерно соответствует диапазону доверительных границ для животных контрольной группы, получающих изотонический раствор.


Эффективность использования метода.


Положительный условный рефлекс на место, ассоциированное с фармакологическим эффектом, оценивается как косвенное свидетельство положительных мотивационных свойств изучаемого соединения. Метод выработки УРПМ в рассмотренной модификации достаточно чувствителен и позволяет выявить аддиктивный потенциал как "больших" (кокаин, морфин), так и малых (кофеин, никотин, этанол) аддиктивных средств. Он также специфичен и не выявляет положительного условного рефлекса на место при сочетании с эталонными веществами, не имеющими аддиктивного потенциала (ненаркотические анальгетики, нейролептики и др.), т.е. не дает ложноположительных реакций. Вместе с тем выработка УРПМ, ассоциированного с фармакологическим эффектом, при отсутствии предпочтения какого-либо из отсеков экспериментальной камеры в контрольной группе (unbiased procedure) не позволяет с уверенностью количественно разделить исследуемые вещества по эффективности (максимуму) подкрепляющего эффекта, а также получить стабильные и воспроизводимые кривые зависимости "доза-эффект".


Для сравнения аддиктивного потенциала соединений можно использовать вариант выработки УРПМ, при котором помещение в один отсек камеры сочетается с действием эталонного наркотика (например, кокаина), а в другой - с действием исследуемого соединения. В этих условиях можно видеть, что животные предпочитают отсек, ассоциированный с инъекцией кокаина по сравнению с местом, где вводились, например, кофеин, никотин или этанол. С другой стороны, животные не отдают явного предпочтения отсеку, ассоциированному с кофеином, перед местом, где они испытывали действие никотина или этанола.


Основные требования к установке для выработки УРПМ у мышей аналогичны таковым для крыс. По сравнению с крысами мыши, как правило, проявляют более высокую двигательную активность в камере и временная асимметрия выражена слабее или отсутствует. Поэтому протокол исследования может предусматривать протесты для оценки исходного предпочтения отсеков камеры животными, и эффект препарата можно оценивать по изменению (приросту в случае УРПМ) времени пребывания животного в данном отсеке после периода фармакологического обусловливания. Исследование может проводится также и по схеме, изложенной выше для выработки условной реакции на место у крыс.


Список литературы:

Экспериментальное доклиническое изучение аддиктивного потенциала фармакологических средств, методические рекомендации N 2000/112