Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Выработка реакции внутривенного самовведения (РВС) у мышей

Выработка реакции внутривенного самовведения (РВС) у мышей


Главное достоинство метода - быстрота получения результатов определяется использование естественной ориентировочно-исследовательской реакции (выглядывание в отверстие при помещении в затененную камеру), хорошо выраженной у мышей. При сочетании с инфузией раствора аддиктивного соединения исследовательская реакция не угашается, а, напротив, оживляется, так как исследуемый препарат обладает "аттрактивными" мотивационными свойствами. Важным элементом метода является использование пары мышей, одна из которых является "активной" (АМ) и ее выглядывания в отверстие приводят к внутривенной самоинфузии исследуемого раствора, а также к инфузии той же дозы в вену второй, контрольной мыши (КМ). Последняя, таким образом, получает инфузии исследуемого соединения в том же режиме, что и АМ, но это введение является принудительным, а не "самовведением", так как оно не зависит от собственной ориентировочно-исследовательской реакции контрольного животного. Использование КМ позволяет оценивать влияние исследуемого препарата на общее поведение, в частности на уровень исследовательской реакции.

Материально-техническое обеспечение метода.

Экспериментальные животные: Мыши-самцы массой 18-24 г.

Установка: Экспериментальная установка должна обеспечивать возможность размещения двух мышей в смежных камерах, размеры которых (например, 8x8x8 см) позволяют животным сохранять относительную свободу движений, в частности выглядывания в отверстия на передней стенке камеры, несмотря на фиксацию хвоста. Передняя стенка каждого бокса имеет отверстие диаметром 1.2 см на высоте 0.5 см от пола, снабженное инфракрасным датчиком для регистрации реакции выглядывания. Фотодатчик через интерфейс связан с компьютером, который по соответствующей программе управляет работой двухшприцевого микроинъектора с шаговыми двигателями, осуществляя кратковременную инъекцию заданного объема раствора исследуемого препарата (1.6 мкл/инъекцию) в ответ на каждое выглядывание. Задняя стенка каждого бокса прорезана вертикальной щелью, шириной 0,5 см. Размещение животного в боксе производят с учетом следующих условий:

1) мышь может свободно выглядывать в отверстие на передней стенке;

2) доступ для пункции к латеральным хвостовым венам не затруднен (хвост выводят через щель на задней стенке за пределы бокса и фиксируют к горизонтальной поверхности липкой лентой);

3) исключается возможность выдергивания иглы и повреждения катетера животным во время эксперимента. По данным литературы и нашему опыту мыши сравнительно легко переносят данную форму частичной иммобилизации.

Описание метода.

Протокол исследования включает исходное тестирование ориентировочно-исследовательской активности и последующую сессию инициации (выработки) РВС.

Задачей исходного тестирования является оценка индивидуальной ориентировочно-исследовательской реакции мышей и основанный на ней подбор пар для сессии РВС. Группы, которые формируются после предварительного тестирования продолжительностью 10 мин., должны содержать не менее 6-8 пар мышей на каждую дозу (концентрацию) и рандомизированы таким образом, чтобы средний уровень исследовательской активности в каждой группе был по возможности близким.

Как показывает опыт инициация РВС как "больших" (морфин, кокаин, амфетамин, эфедрон), так и "малых" (никотин, кофеин, этанол) аддиктивных средств происходит в течение 10-20 минут. Поэтому общая продолжительность сессии с выработкой РВС составляет 30 минут. Предварительно отобранные пары мышей помещают в экспериментальные боксы и после 3-4 минут адаптации в латеральные хвостовые вены обеих мышей вводят иглы, подсоединенные к инъектору через полиэтиленовые катетеры. Во время тридцатиминутной сессии выработки РВС "активная мышь" (АМ) получает в/в инъекции исследуемого раствора после каждого выглядывания. Контрольная "пассивная мышь" (КМ) получает инъекции в ритме выглядываний АМ, но вне связи с собственными выглядываниями. Таким образом, оба животных получают одинаковое число инъекций с одинаковым распределением инъекций во времени и, соответственно, одинаковую дозу препарата, что позволяет при оценке эффекта и сравнении данных у АМ и КМ "уравнять" влияние препаратов на двигательную и исследовательскую активность. По окончании 30 минут иглы извлекают и животных возвращают в общую клетку.

Заключение о положительно-подкрепляющем эффекте исследуемого соединения основывают на расхождении количества выглядываний (КВ) АМ и КМ. Если за период сессии КВ АМ превышает КВ ПМ, то делают заключение о мотивационно-позитивном (положительно-подкрепляющем) эффекте соединения. Если КВ АМ в период сессии меньше по сравнению с КВ ПМ, то эффект соединения расценивают как "аверсивный" ("наказующий").

Эффективность использования метода.

Кривая зависимости "концентрация-эффект" (эффект оценивается по разности КВ АМ и КМ) при инициации РВС имеет характерную для данной модели куполообразную форму с максимальным значением показателя при определенной концентрации(иях)/разовой дозе(ах), характеризующих наиболее активный мотивационный эффект соединений. Модель инициации РВС у мышей проявила высокую чувствительность и селективность. Так, на этой модели в течение одной экспериментальной сессии выявляются подкрепляющие свойства не только эталонных аддиктивных средств (опиаты, кокаин, амфетамин, эфедрон), но и таких веществ как этанол, никотин, кофеин. Опиоидные аналгетики, которые лишены выраженного аддиктивного потенциала (буторфанол, налбуфин, трамадол) не проявляют подкрепляющих свойств на данной модели.

Список литературы:

Экспериментальное доклиническое изучение аддиктивного потенциала фармакологических средств, методические рекомендации N 2000/112