Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

Инициация и поддержание реакции внутривенного самовведения (РВС) у крыс

Инициация и поддержание реакции внутривенного самовведения (РВС) у крыс

Материально-техническое обеспечение метода.

Экспериментальные животные: крысы-самцы линии Wistar массой 180-200 гр.

Установка. Камеры, в которые помещают животных, имеют размер 30x30x30 см и снабжены двумя педалями. Одна из них при замыкании контактов включает инъектор, а вторая необходима для контроля неспецифической оперантной активности животного. Возможно использование камер, снабженных не педалями, а двумя отверстиями диаметром 1.5 см на высоте 2.0 см от пола и на расстоянии 15 см друг от друга. В оба отверстия вмонтированы инфракрасные датчики связанные через интерфейс с компьютером типа PC, причем одно из отверстий является "активным" и выглядывание в него ведет к инфузии исследуемого раствора. Оперантный ответ типа выглядывания является более естественным для крыс, чем нажатие на педаль и вырабатывается быстрее.

Для инфузии веществ используют микродозаторы с регулируемыми скоростью подачи растворов (от долей секунды до 10-20 секунд) и объемом разовых инфузии (от 10 до 400 мю л/кг). Оптимальные параметры (объем разовой инфузии и болюсная доза) подбираются индивидуально для каждого препарата. Инфузию сочетают со световым раздражителем, сигнализирующем о фармакологическом подкреплении инструментальной реакции. Инфузии производятся автоматически в ответ на выглядывание в одно из отверстий или в ответ на нажатие на соответствующую педаль. Соответственно, оперантные реакции на протяжении срабатывания инъектора (от 2 до 13 секунд в зависимости от марки и типа микродозатора) фиксируются, однако не ведут к активации инъектора.

Для обеспечения свободы перемещения животных в эксперименте применяют шарнирное соединительное устройство ("swivel joint"), предупреждающее перекручивание соединительных трубок от катетера к инъектору.

Описание метода.

Крысам под общей анестезией через наружную яремную вену в ушко правого предсердия имплантируют силиконовые катетеры, которые фиксируют на черепе животного акриловым цементом. Через 3-4 суток после операции крыс переводят в Место содержания и/или разведения, осуществляемое в соответствии с правовыми нормами использования животных при проведении доклинических исследований.виварий с инвертированным световым режимом и им ограничивают пищевой рацион с целью снижения массы на 10-15% от исходной. Через 3 дня после этого приступают к выработке РВС. Перед началом тестирования проверяют проходимость катетера путем введения 0.1-0.2 мл изотонического солевого раствора.

Протокол опыта предусматривает повторные ежедневные посадки животного в экспериментальную камеру и регистрацию количества оперантных реакций за время эксперимента. Практически удобнее использовать ограниченную во времени сессию РВС (1-3 часа). Задачи исследования определяют повторность и регулярность сессий. При выработке РВС обычно к пятой сессии выясняется, способно ли животное обучиться РВС при избранной разовой дозе исследуемого соединения. Рекомендуется исследовать несколько разовых доз (не менее 4-5) исследуемого соединения.

Показателями РВС являются количество самовведений препарата в каждый из тестовых дней, а также количество выглядываний в неактивное отверстие (или нажатий на "неактивную" педаль). Регистрируют также суммарную дозу вещества, введенную за сессию. В случае использования протокола выработки РВС после окончания эксперимента (5 дней) животных забивают и положение в/в канюли верифицируют гистологически. В опытах с поддержанием РВС после периода тренировки (5-8 дней) большинство животных (60-70%) обучается самовведению эталонных аддиктивных соединений (кокаина, морфина, этанола). В дальнейших опытах используют только животных со стабильным уровнем потребления эталонного аддиктивного препарата (колебания не более 15% от среднего уровня на протяжении 3 последовательных экспериментальных сессий).

Эффективность использования метода.

РВС у крыс используется для предсказания аддиктивного потенциала физиологически активных соединений почти сорок лет. Модель подтвердила свою чувствительность и специфичность. С ее помощью выявляются подкрепляющие свойства практически всех психоактивных соединений, которые известны свои аддиктивным потенциалом у человека. Соответственно, вещества, не являющиеся объектом злоупотребления у человека, не поддерживают РВС у крыс.

Список литературы:

Экспериментальное доклиническое изучение аддиктивного потенциала фармакологических средств, методические рекомендации N 2000/112