Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

OECD, TEST №413:2009 Субхроническая ингаляционная токсичность: 90-дневное исследование.

Введение

Данное пересмотренное Руководство по испытанию 413 (ТГ413) было разработано для того, чтобы полностью охарактеризовать Мера вредного воздействия исследуемого материала на организм в условиях однократного или многократного введения.токсичность исследуемого препарата при ингаляционном поступлении в течение субхронического воздействия продолжительностью 90 дней, а также обеспечить надежными данными для количественных оценок риска вдыхания.

До проведения исследования в целях повышения качества исследования и минимизации используемых животных испытательной лаборатории должна быть рассмотрена вся доступная информация об исследуемом препарате. Информация, которая поможет в выборе подходящих концентраций испытания, может включать идентичность, химическую структуру и физико-химические свойства исследуемого препарата; результаты любых in vitro или in vivo испытаний токсичности; предполагаемое (-ые) использование (-я) и вероятное воздействие на человека; доступные данные (Q)SAR и токсикологические данные структурно родственных веществ; а также данные, полученные из других исследований повторного воздействия. Если в ходе исследования ожидается или наблюдается нейротоксичность, Лицо, ответственное за проведение неклинического исследования в области медицинской и экологической безопасности от начала до конца.руководитель исследования может выбрать включение подходящих оценок, таких как функциональная наблюдательная батарея (ФНБ) и измерение двигательной активности. Хотя определение времени воздействия по отношению к конкретным исследованиям может быть критическим, выполнение этих дополнительных мероприятий не должно нарушать основной план исследования.

Растворы агрессивных или раздражающих исследуемых препаратов могут быть испытаны при концентрациях, которые дадут желаемую степень токсичности (см. GD 39 [3]) При воздействии этих препаратов на животных, целевые концентрации должны быть достаточно низкими, чтобы не вызвать заметной боли и дистресса, но достаточными, чтобы продлить кривую концентрация-ответ до уровней, которые достигают регуляторной и научной цели испытания. Эти концентрации должны быть выбраны в индивидуальном порядке, предпочтительно на основе адекватно разработанного исследования по определению диапазона доз, которое дает информацию относительно критической конечной точки, любого порога раздражения и времени наступления. Основание для выбора концентрации должно быть предоставлено.

Умирающие животные или животные, явно, испытывающие боль или показывающие признаки тяжелого и продолжительного дистресса, должны быть гуманно умерщвлены. Умирающих животных учитывают таким же образом, что и животных, которые умирают во время испытания. Критерии для принятия решения об умерщвлении умирающих или тяжело страдающих животных, и рекомендации по распознаванию прогнозируемой или приближающейся смерти рассматриваются в руководящем документе ОЭСР о гуманных конечных точках [4].

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОИ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА.

Субхроническая ингаляционная токсичность: 90-дневное исследование.

OECD guidelines for the testing of chemicals. Subchronic Inhalation Toxicity: 90-Day Study

Дата введения - 201-____ -_

Область применения

Данное пересмотренное Руководство по испытанию 413 (ТГ 413) было разработано для того, чтобы полностью охарактеризовать токсичность исследуемого препарата при ингаляционном поступлении в течение субхронического воздействия продолжительностью 90 дней, а также обеспечить надежными данными для количественных оценок риска вдыхания. Группы из 10 самцов и 10 самок грызунов подвергаются 6 часов в день в течение 90 дней (13 недель) воздействию: а) исследуемого препарата при трех или более уровнях концентрации, б) отфильтрованного воздуха (негативный контроль) и / или с) растворителя (контроль растворителя). Животные, как правило, подвергаются воздействию 5 дней в неделю, но также допустимо воздействие в течение 7 дней в неделю. Самцов и самок испытывают постоянно, если известно, что один пол более подвержен воздействию данного исследуемого препарата, то особи могут подвергаться воздействию при различных уровнях концентрации. Это руководство позволяет руководителю исследования включать вспомогательные (реверсивные) группы  промежуточных умерщвлений, бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), неврологических испытаний, а также дополнительных оценок клинической патологии и гистопатологических оценок для того, чтобы лучше охарактеризовать токсичность исследуемого препарата.

Руководство ОЭСР периодически пересматривают с учетом достижений научно-технического прогресса, соображений защиты животных и изменения нормативных требований. Исходное Руководство 413 (TG 413) по испытанию субхронического вдыхания было принято в 1981 году [2]. TG 413 был пересмотрен с учетом состояния науки и для соблюдения действующих и ожидаемых нормативных требований.

Исследования субхронической ингаляционной токсичности в основном используют для получения регуляторных концентраций для оценки риска работника в условиях специальности. Также они используются для оценки жилья человека, транспортного и экологического рисков. Это руководство дает характеристику вредным эффектам, которые проявляются после повторного ежедневного ингаляционного воздействия исследуемого препарата в течение 90 дней (приблизительно 10 % продолжительности жизни крыс). Данные, полученные из исследований субхронической ингаляционной токсичности, могут быть использованы для количественных оценок риска и для выбора концентраций для хронических исследований. Данное Руководство по испытанию специальным образом не предназначено для тестирования наноматериалов. Определения, используемые в рамках данного Руководства по испытанию, можно найти в Руководстве 39 [3].

Описание метода

Животные

Выбор видов

Следует использовать здоровых молодых половозрелых грызунов наиболее часто используемых лабораторных линий. Предпочтительно использовать крыс. Могут быть использованы другие виды, но их применение требует обоснования.

Подготовка

Самки должны быть нерожавшими и небеременными. На день отбора для эксперимента животные должны быть в возрасте от 7 до 9 недель. Диапазон колебания массы тела животных для каждого пола не должен превышать ± 20% от средней массы тела всех животных, задействованных в исследовании, отдельно каждого пола. Животные отбираются в случайном порядке и маркируются то позволит идентифицировать каждое из них, и содержатся в клетках в течение 5 дней до начала испытания для адаптации к лабораторным условиям.

Условия содержания и кормления

Животных следует помечать индивидуальными идентификаторами, если возможно, подкожными маяками- ответчиками, чтобы облегчить процесс наблюдения и избежать путаницы. Температура в помещении с экспериментальными животными должна составлять 22 ± 3°С. Относительная влажность должна варьироваться между 30 % и 70 %, но это может быть недостижимо, если вода используется в качестве растворителя. Перед и после воздействия животных, как правило, следует содержать в клетках группами одного пола и одной концентрации, но количество животных на клетку не должно затруднять наблюдения за каждым животным в клетке и должно минимизировать вероятность потерь от каннибализма и борьбы. Если животные подвергаются воздействию только через нос, им может потребоваться привыкнуть к ограничивающей трубке. Ограничивающие трубки не должны вызывать у животных физический или температурный стресс или приводить к потере подвижности. Средства механического удерживания могут повлиять на физиологические объекты исследования, как, напр., температура тела (гипертермия) и/или минутный объем легочной вентиляции. Если данные показывают, что подобные изменения не являются значимыми, то адаптация к ограничивающим трубкам не является необходимой. Животных, подвергающихся воздействию аэрозолем через все тело, следует содержать индивидуально на протяжении периода экспозиции, чтобы уберечь их от проникновения тестируемого аэрозоля через шерстку партнеров по клетке. Могут использоваться традиционные и проверенные лабораторные диеты, за исключением периода экспозиции испытываемого препарата, во время которого для животного необходимо обеспечить неограниченное количество питьевой воды. Освещение должно быть искусственным в режиме 12 часов при свете/12 часов в темноте.

Ингаляционные камеры

Природа исследуемого препарата и предмет исследования должны быть учтены при выборе ингаляционной камеры. Предпочтительной моделью воздействия является воздействие через нос (данный термин включает воздействие «только через голову», «только через нос», «только через мордочку»). Экспозиция «только через нос», как правило, предпочтительна при исследованиях жидких или твердых аэрозолей, а также для паров, которые могут конденсироваться и образовывать аэрозоль. Специальные цели исследования могут быть достоверней достигнуты при модели воздействия «через все тело», но применение такой модели должно быть обосновано в отчете об исследовании. Чтобы обеспечить атмосферную стабильность при использовании камеры для воздействия «через все тело», общий «объем» испытуемых животных не должен превышать 5% от объема камеры. Методика воздействий «только через нос» и «через все тело», а также их положительные и отрицательные особенности отражены в GD 39 [3].

Исследование токсичности

Предельные концентрации

В отличие от исследований острой токсичности, в исследованиях субхронической ингаляционной токсичности определенного предела концентраций не существует. Максимально тестируемая концентрация должна учитывать: 1) максимально достижимую концентрацию, 2) при воздействии на человека уровень, при которым разворачивается наиболее неблагоприятный сценарий, 3) необходимость поддерживать соответствующий объем кислорода и/или 4) соображения о защите животных. В отсутствии данных о предельных концентрациях, можно использовать предельные концентрации для острой токсичности Согласованной на глобальном уровне системы классификации и маркировки химических веществ ООН (т.е. вплоть до максимальной концентрации 5 мг/л для аэрозолей, 20 мг/л для паров и 20,000 ррm для газом); см. GD 39 [3]. Если при тестировании газов или высоко летучих исследуемых препаратов (напр., жаропонижающие средства) возникла необходимость превысить эти предельные концентрации, следует привести обоснование. Предельная концентрация должна вызывать явную интоксикацию, не приводя к чрезмерному стрессу у животных и не влияя на продолжительность их жизни [4].

Исследование по определению диапазона доз

Прежде чем приступить к основному исследованию, может возникнуть необходимость в определении диапазона концентраций для исследования. Определение диапазона концентраций для исследования является более полным нежели визуальное изучение, потому что оно не ограничено отбором концентраций. Информация, полученная в результате определения диапазона концентраций для исследования, может помочь провести основное исследование более успешно. Определение диапазона концентраций для исследования может, например, дать информацию об аналитических методах, об измерении частиц, об обнаружении механизмов интоксикации, данные клинической патологии и гистопатологии, расчеты, какими могут быть концентрации NOAEL (уровень отсутствия наблюдаемого вредного воздействия после введения вещества, является максимальной дозой, не вызывающей обнаруживаемого вредного воздействия на здоровье) и МТС (минимальная токсическая концентрация) в основном исследовании. Руководитель исследования по определению диапазона концентраций может использовать для установления порога раздражения дыхательных путей (напр., с помощью гистопатологии дыхательных путей, тестирование легочной функциональной пробы, или бронхоальвеолярный лаваж), наивысшей концентрации, которая не вызывает стресса у животных и изменения параметров, которые наиболее полно характеризуют токсичность исследуемого вещества.

Определение диапазона концентраций может состоять из одного или более уровней концентрации. Не более трех самцов и трех самок следует подвергать воздействию каждого уровня концентрации. Определение диапазона концентраций должно длиться не менее 5, но, как правило, не более 14 дней. Обоснование выбора концентрации для основного исследования необходимо отразить в отчете по основному исследованию. Цель основного исследования — выявляется установление зависимости «концентрация-ответ», базирующийся на основе наиболее чувствительных показателей. Низкий уровень концентрации в идеале не должен вызывать наблюдаемого токсического эффекта, тогда как высокий уровень концентрации должен вызывать явную токсичность, не приводя к чрезмерному стрессу у животных и не влияя на продолжительность их жизни [4].

При выборе уровня концентрации для определения диапазона концентраций вся имеющаяся информация, включая данные о зависимости активности препарата от структуры вещества и данные по сходным химикатам, должны быть учтены (см. Область применения). Определение диапазона концентраций может подтверждать/опровергать то, какие показатели являются наиболее чувствительными, напр., ингибирование холинэстеразы для органофосфатов, образование метагемоглобина путем эритроцитотоксических агентов, тиреоидные гормоны (ТЗ, Т4) для тиреотоксинов, белок, LDH, или нейтрофилы в бронхоальвеолярном лаваже для безвредных плохо растворимых частиц или аэрозолей с легочно-раздражающим действием.

Основное исследование

Основное исследование субхронической токсичности как правило, включает три уровня концентрации, а также одновременно негативный контроль (воздух) и/или контроль растворителя при необходимости. Следует использовать все имеющиеся данные, чтобы способствовать выбору соответствующих уровней воздействия, включая результаты системных исследований токсичности, метаболизм и кинетику (особое внимание следует уделить тому, чтобы избежать высоких уровней концентрации, которые насыщают кинетические процессы). Каждая экспериментальная группа включает грызунов из 10 самцов и 10 самок, которые подвергаются воздействию исследуемого препарата в течение 6 часов в день 5 дней в неделю на основе периода в 13 недель (общая продолжительность исследования не меньше 90 дней). Животные могут подвергаться воздействию также 7 дней в неделю (напр., при тестировании вдыхаемых фармацевтических продуктов). Если известно, что один пол более чувствителен к воздействию тестируемого вещества, животные разных полов могут подвергаться воздействию различных уровней концентраций с целью оптимизировать зависимость «концентрация- ответ». Если воздействию «только через нос» подвергаются другие виды грызунов, помимо крыс, то можно отрегулировать максимальную продолжительность воздействия с целью минимизировать дистресс, характерный для данного вида. В случае, если продолжительность экспозиции составляет менее 6 часов/день, или, при необходимости, используется долгосрочное (напр., 22 ч/день) исследование с воздействием «через все тело», следует привести обоснование (см. GD 39 [3]). Во время экспозиции рекомендуется голодание животных, если только экспозиция не превышает 6 часов. Во время воздействия «через все тело» животным можно давать воду.

Выбранные целевые концентрации должны идентифицировать органы-мишени и показывать четкую зависимость «концентрация- ответ»:

 

- Высокий уровень концентрации должен вызывать токсический эффект, но не приводить к затяжным признакам интоксикации или летальности, что может препятствовать правильной оценке.

- Средний(е) уровень(уровни) концентрации должны быть между низким и высоким уровнями концентрации для градации токсических эффектов.

- Низкий уровень концентрации должен вызывать слабые эффекты или вообще не вызывать признаков интоксикации.

Промежуточные умерщвления

Если запланированы промежуточные умерщвления, количество животных при каждом воздействии должно быть увеличено на количество, которое должно быть умерщвлено до завершения исследования. Для применения промежуточных умерщвлений должно быть предоставлено обоснование, а также они должны быть правильно учтены в статистических анализах.

Вспомогательное (реверсивное) исследование

Вспомогательное (реверсивное) исследование может использоваться для наблюдения за обратимостью, стойкостью или отдаленными проявлениями интоксикации после эксперимента в течение соответствующего времени, но не более 14 дней. Вспомогательные (реверсивные) группы состоят из 10 самцов и 10 самок, подвергаемых воздействию одновременно с экспериментальными животными в основном исследовании. Группы вспомогательного (реверсивного) исследования должны подвергаться воздействию исследуемого препарата с максимальным уровнем концентрации, и при необходимости следует проводить одновременный контроль воздуха и / или среды.

Контрольные животные

Животные в параллельной негативной (воздушной) группе должны содержаться в условиях, идентичных тем, в которых содержатся животные в экспериментальной группе, за исключением того, что они подвергаются воздействию отфильтрованного воздуха, а не исследуемого вещества. Если вода или другая субстанция используется в процессе генерации исследуемой атмосферы, в исследование следует включить группу по контролю среды, вместо группы по негативному (воздушному) контролю. По возможности в качестве среды следует использовать воду. Если в качестве среды используется вода, контрольных животных следует подвергать воздействию воздуха при таком же уровне относительной влажности, что и в исследуемых группах. Выбор подходящей среды должен опираться на соответствующим образом полученные пред- испытательные или ретроспективные данные. Если токсичность среды не общеизвестна, руководитель исследования может решить применить и негативный (воздушный) контроль, и контроль среды, но

это крайне нежелательно. Если ретроспективные данные показывают, что среда нетоксична, то в негативных (воздушных) контрольных группах нет необходимости и следует применять только контроль среды. Если предварительное исследование тестируемого вещества, введенного в среду, не выявляет токсичности, то из этого следует, что среда в тестируемой концентрации нетоксична и необходимо выполнение контроля среды.

Условия проведения исследования

Введение концентраций

Животные подвергаются воздействию исследуемого вещества в виде газа, паров, аэрозоля или их смеси. Исследуемое физическое состояние зависит от физико-химических свойств тестируемого препарата, выбранной концентрации и/или физической формы, которые наиболее вероятно присутствуют во время и использования исследуемого препарата. Зернистый материал может быть подвергнут механическим процессам, чтобы добиться требуемого гранулометрического состава. Дальнейшие правила содержатся в GD 39 [3].

Гранулометрический состав

Размеры частиц должны быть определены для всех аэрозолей и для паров, которые могут конденсироваться в форму аэрозоля. Чтобы обеспечить воздействие на все важные области дыхательных путей, рекомендуется использование аэрозоля с массовым средним аэродинамическим диаметром (MMAD) в диапазоне от 1 до 3 мкм с геометрическим стандартным отклонением (ад) в диапазоне от 1,5 до 3,0 [4]. Следует приложить должные усилия, чтобы соблюсти указанное требование; в случае, если это невозможно, необходимо предоставить экспертную оценку. Например, металлические частицы в воздухе могут быть меньшего размера, чем стандартные, а также заряженные частицы и волокна могут превышать размер стандартных. 2.4.3 Приготовление исследуемого вещества в среде В идеале тестируемый препарат следует испытывать без использования среды. Среду необходимо использовать для создания соответствующей концентрации исследуемого вещества и размера частиц, при этом предпочтение отдается воде. Если исследуемый препарат растворен в среде, его стабильность должна быть установлена.

Контроль условий экспозиции

Воздушные потоки в камере

Поток воздуха, проходящий через камеру воздействия, должен тщательно контролироваться, непрерывно измеряться и регистрироваться, по крайней мере, ежечасно в течение каждого воздействия. Процедура контроля за ходом доклинического (неклинического) исследования и обеспечением его проведения, сбора данных и представления результатов исследования согласно протоколу, стандартным операционным процедурам и настоящему стандарту.Мониторинг в реальном времени концентрации среды испытания (или временной стабильности) представляет собой полное измерение всех динамических параметров и предоставляет косвенные средства контроля всех соответствующих динамических параметров ингаляции. Если концентрация измеряется в режиме реального времени, частота измерения воздушных потоков может быть сведена к одному единичному измерению воздействия в день. Особое внимание следует уделить, чтобы избежать возвратного дыхания в камерах только через нос. Концентрация кислорода должна быть не менее 19 %, а концентрация углекислого газа не должно превышать 1 %. Если есть основания полагать, что данная норма не может быть соблюдена, концентрация кислорода и углекислого газа должны быть измерены. Если измерения в первый день воздействия показывают, что концентрация этих газов на надлежащем уровне, никакие дополнительные измерения не требуются.

Температура и относительная влажность в камере

Температура в камере должна составлять 22 ± 3°С. Относительную влажность в дыхательной зоне животных при воздействиях и «через нос», и «через все тело», следует проверять постоянно и фиксировать каждый час в течение всего времени экспозиции, если это возможно. Относительная влажность должна предпочтительно составлять 30 % - 70 %, но в определенных случаях (напр., при тестировании препарата на водной основе) данный уровень может быть неприменим или не измеряем вследствие взаимовлияния исследуемого препарата и метода исследования.

Исследуемое вещество: номинальная концентрация

По возможности следует наблюдать и фиксировать номинальную концентрацию при экспозиции в клетке. Номинальная концентрация - это масса сгенерированного испытываемого вещества, разбавленная общим объемом воздуха, проходящего через ингаляционную систему камеры. Номинальная концентрация не используется при описании экспозиции на животных, но сравнение номинальной и фактической концентраций позволит судить об эффективности генератора в испытательной системе и позволит вовремя выявить проблемы в нем.

Исследуемое вещество: фактическая концентрация

Фактическая концентрация - это концентрация исследуемого препарата в зоне дыхания животных в ингаляционной камере. Фактические концентрации могут быть получены специальными методами (напр., методом непосредственного выбора, адсорбционным методом или методом химической реактивности, и последующим анализом) или неспециальными методами, напр., гравиметрический капельный анализ. Использование гравиметрического анализа допустимо только для однокомпонентных порошкообразных веществ в аэрозольной упаковке или для жидких аэрозолей с низкой летучестью и должно быть подкреплено предварительно полученными соответствующими специальными характеристиками исследуемого препарата. Концентрацию аэрозоля с многокомпонентного порошка можно также определить с помощью метода гравиметрического анализа. В этом случае потребуются данные анализа, подтверждающие, что состав аэрозоля-вещества схож с составом исходного материала. Если подобная информация не имеется, может потребоваться повторный анализ исследуемого вещества (в идеале, в воздушном состоянии) в определенные временные интервалы в течение всего исследования. Для аэрозолей, которые могут испаряться или сублимироваться, следует указать, что все фазы среды были исследованы выбранным методом.

Необходимо по возможности использовать один и тот же препарат для тестирования; исследуемый образец должен храниться в условиях, которые позволят сохранить его степень чистоты, однородность и стабильность. Перед началом исследования необходимо располагать описанием препарата, включая его степень чистоты и, если это технически возможно, его обозначение и количество выявленных в нем примесей и загрязняющих веществ. Такие сведения можно наглядно показать с помощью следующих, но не ограничиваясь ими, данных: время удержания и относительная величина пика, молекулярная масса, полученная методом масс-спектроскопии или газохроматографии, или другие подсчеты. Хотя определение тестовых образцов не входит в обязанности испытательной лаборатории, возможно, целесообразно подтвердить спонсорские характеристики, по крайней мере, в ограниченном виде (напр., цвет, физическая природа и т.д.).

Воздействующую атмосферу следует поддерживать в неизменном состоянии, насколько это возможно. Прибор для контроля в реальном времени, такой как фотометрический счетчик для аэрозольных частиц для аэрозолей или общий гидрокарбонный анализатор для паров, могут использоваться для показателя стабильности условий экспозиции. Фактическую концентрацию в камере следует измерять не менее трех раз в каждый день экспозиции на каждом уровне экспозиции. Если это невозможно вследствие ограниченных воздушных потоков или низкой концентрации, за все время периода экспозиции допускается отбор одной пробы. В идеале этот образец следует брать в течение всего периода экспозиции. Образцы концентрации для каждой камеры не должны отклоняться от средней концентрации более чем на ± 10% для газов и паров или ± 20% для жидких и твердых аэрозолей. Время для достижения равновесного состояния и перехода к распаду (t 95) нужно измерить и зафиксировать. Период воздействия охватывает время генерации исследуемого вещества. При этом учитывается время, необходимое для достижения равновесного состояния в камере (t 95) и перехода к распаду. Инструкция по расчету t95 содержится в GD 39 [3].

Для сложных смесей из газов/паров и аэрозолей каждая фаза может демонстрировать разное поведение в ингаляционной камере. По этой причине для каждой фазы (газ/пар или аэрозоль) следует выбрать по меньшей мере одну индикаторную субстанцию (аналит), как правило, основную активную в лекарственной форме исследуемого препарата. Когда тестируемый препарат является смесью (напр., по составу), аналитическая концентрация должна быть описана для общего состава и не только для активного ингредиента или компонента (вещества, определяемого при анализе). Дополнительная информация о фактической концентрации содержится в GD 39 [3].

Исследуемое вещество: Гранулометрический состав

Гранулометрический состав аэрозолей следует определять не реже чем раз в неделю для каждого уровня концентрации путем использования каскадного импактора или альтернативного прибора, напр., аэродинамического спектрометра (APS). Если удастся показать равнозначность результатов, полученных каскадным импактором и альтернативным прибором, то допускается использование альтернативного прибора в исследовании.

 

Второе устройство, такое как гравиметрический фильтр или импинджер/образователь газовых пузырьков, следует использовать параллельно основному инструменту для подтверждения эффективности его работы. Массовая концентрация, полученная гранулометрическим анализом, должна находиться в разумных пределах массовой концентрации, полученной в результате анализа работы фильтров (см. GD 39 [3]). Если удастся показать равнозначность результатов для всех концентраций, тестируемых на раннем этапе исследования, проведение дальнейших подтверждающих измерений можно избежать. Из соображений заботы о животных измерения следует проводить таким образом, чтобы минимизировать получение неубедительных данных, что может привести к повторному исследованию.

Определение размеров частиц следует выполнить для паров, если есть любая вероятность, что конденсация паров ведет к образованию аэрозоля или если частицы обнаружены в атмосфере паров с потенциалом смешанных фаз.

Наблюдения

Клинические наблюдения за животными следует проводить до, во время и после периода экспозиции. Более частые наблюдения могут потребоваться в зависимости от реакции животных во время экспозиции. Если наблюдения за животными затруднены из-за использования сдерживающих трубок, плохого освещения в камерах для воздействия через все тело или непрозрачной атмосферы, животных следует тщательно осматривать после экспозиции. Наблюдения накануне экспозиции могут зафиксировать реверсивность или обострение токсических эффектов. Все наблюдения фиксируются отдельно по каждому животному. Когда животных умерщвляют из гуманных соображений или находят мертвыми, время смерти следует зафиксировать как можно точнее. Наблюдения в клетке должны фиксировать изменения на коже и шерсти, глазах и слизистых оболочках, а также в дыхательной и кровеносной системах, изменения в нервной системе, а также соматомоторной активности и в поведении. По возможности следует отмечать различия между локальными и оставшимися системными эффектами. Внимание следует направить на наблюдения за тремором, конвульсиями, слюноотделением, диареей, апатией, сном и комой. Измерение ректальной температуры позволит удостовериться в рефлекторном брадипноэ или гипо/гипертермии, связанной с воздействием вещества или обездвиженностью. Дополнительные наблюдения, напр., за кинетикой, биомониторингом, легочными функциями, ретенцией слабо растворимых материалов, которые накапливаются в легочных тканях, за поведенческими изменениями, могут быть включены в протокол исследования.

 

Массы тела

Индивидуальные массы животного должны быть записаны незадолго до первого воздействия (0 день), в дальнейшем дважды еженедельно (например, по пятницам и понедельникам, чтобы продемонстрировать восстановление в течение выходных при отсутствии воздействия или в временном интервале, позволяющем оценить систематическую токсичность), и в момент смерти или эвтаназии. При отсутствии эффекта в течение первых 4 недель, для оставшейся части исследования массу тела можно измерять еженедельно. Вспомогательных (реверсивность) животных (при использовании) следует продолжать взвешивать еженедельно в течение периода восстановления. При завершении исследования, все животные должны быть взвешены незадолго до умерщвления, чтобы обеспечить объективные рассчитанные соотношения органа к массе тела.

Потребление пищи и воды

Объем потребляемой пищи следует измерять еженедельно. Также объем потребляемой воды может быть измерен.

Клиническая патология

Определение клинических патологий должно быть выполнено для всех животных, включая животных в контрольных и вспомогательных (реверсивных) группах, когда они умерщвлены.

Временной интервал между окончанием воздействия и сбором крови должен быть зафиксирован, особенно когда восстановление органов- мишений происходит быстро. Взятие проб после окончания экспозиции указано для тех параметров с коротким периодом полураспада плазмы (напр., СОНb, СНЕ, and MetHb).

В Таблице 1 приведены параметры клинической патологии, исследование которых, как правило, требуется во всех токсических испытаниях. Анализ мочи в общепринятой практике не является обязательным, но он может быть выполнен, если это может быть полезным в целях предполагаемой или наблюдаемой токсичности. Руководитель исследования может выбрать для оценки дополнительные параметры, чтобы более полно охарактеризовать токсичность исследуемого вещества (напр., холистераза, липиды, гормоны, кислотно-щелочной баланс, метгемаглобин или тельца Хайнца, креатинкиназа, миелоидно/эритроидное соотношение, тропонины, газы в артериальной крови, лактатдегидрогеназа, сорбитдегидрогеназа, глутамат дегидрогеназа и гамма глутамил транспептидаза).

Таблица 1: Параметры в стандартной клинической патологии











































Гематология

Подсчет эритроцитов Подсчет общего количества лейкоцитов
Концентрация гемоглобина Подсчет дифференцированных лейкоцитов
Средний эритроцитарный Подсчет тромбоцитов
гемоглобин Потенциал свертывания (выбрать одно):
Среднее гематокритное число Протромбированное время
Концентрация среднего эритроцитарного гемоглобина Время неполного тромбопластина
Ретикулоциты

Клиническая биохимия

Глюкоза* Аланинаминотрансфераза
Москва, Малая Пироговская улица, 13 к. 1, 4 этаж
+7 (495) 150 41 90 | info@labmgmu.ru