Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

OECD, TEST NO453:2009 Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности

Введение

Руководства ОЭСР по испытаниям химических веществ (TG) периодически пересматриваются с учетом научного прогресса, изменения норм оценивания и из соображений благополучия животных. Первоначальный проект Руководства 453 был принят в 1981 году. Расширение обновлённого TG 453 было необходимо для того, чтобы отразить последние изменения в сфере благополучия животных и норм регулирования [2, 3, 4, 5, 6]. Обновление TG 453 осуществлялось параллельно с исправлениями в TG 451: исследования канцерогенности и 452: исследования хронической токсичности, с целью получения дополнительных данных от использованных в исследовании животных и обеспечения дальнейшей информацией по выбору дозы.

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА.

Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности.

OECD guidelines for the testing of chemicals. Combined Chronic ToxicityCarcinogenicity Studies

Дата введения - 201-__ -_

Область применения

Данный стандарт предназначен для тестирования широкого спектра химических веществ, включая пестициды и промышленные химикаты. Следует отметить, однако, что некоторые детали и требования могут отличаться для фармацевтических препаратов (см. Руководство S1B по тестированию канцерогенности фармацевтических препаратов Международной конференции по гармонизации).

Большая часть исследований хронической токсичности и канцерогенности осуществлялась на грызунах и поэтому данный стандарт предназначен, прежде всего, для исследований, осуществляемых на особях этого вида. Если бы такие исследования потребовались для особей другого вида, изложенные принципы и методы также могли бы быть использованы, с надлежащими изменениями, вместе с теми, что описаны в ОЭСР TG 409, 90-дневное исследование пероральной токсичности повторяющейся дозы у не­грызунов [7], как изложено в документе № 116 Руководства ОЭСР по разработке и проведению исследований хронической токсичности и канцерогенности [8].

В исследованиях хронической токсичности/канцерогенности используются три основных способа введения: пероральный, дермальный и ингаляторный. Выбор способа введения зависит от физических и химических свойств тестируемого вещества, а также от основного пути введения в организм человека. Дополнительная информация по выбору способа введения приведена в Руководстве № 116 [8].

В стандарте основное внимание уделяется пероральному способу введения, как наиболее распространенному в исследованиях хронической токсичности и канцерогенности. Хотя долгосрочные исследования, включающие накожный или ингаляционный пути введения, также могут быть востребованы для оценки риска здоровью человека и/или по определенным нормативным требованиям, оба способа введения предполагают значительную техническую сложность. Такие исследования нужно разрабатывать для каждого случая отдельно, хотя руководство, составленное здесь для оценки и анализа хронической токсичности и канцерогенности при пероральном введении, могли бы лечь в основу документа для ингаляционного и/или дермального исследований (в отношении рекомендаций по срокам терапии, клиническим и патологическим показателям и т.д.) Имеются руководства ОЭСР по введению тестируемых веществ ингаляционным [8, 9] и накожным способами [8]. TG 412 [10] и TG 413 [11], вместе с методическим документом ОЭСР по исследованию острой аспирации [9], должны быть приняты во внимание при разработке более длительных исследований, затрагивающих ингаляционный способ введения. TG 410 [12] должен быть принят во внимание в случае тестирования, осуществляемого дермальным путем.

Комбинированные исследования хронической токсичности / канцерогенности дают информацию о возможной опасности для здоровья, которая может возникнуть в результате повторяющегося воздействия в течение всего жизненного цикла подопытных видов.

Исследование обеспечит получение данных о токсическом воздействии вещества, включая потенциальную канцерогенность, определит органы-мишени и возможность кумуляции. Оно может дать оценку наименьшего уровня наблюдаемого вредного воздействия для токсичных воздействий и, в случае негенотоксичных канцерогенов, для опухолевых реакций, которые могут быть использованы для установления критериев безопасности для введения человеку.

Следует также подчеркнуть необходимость тщательного клинического наблюдения за животными для получения максимально возможного количества информации.

Цели исследований хронической токсичности/канцерогенности, охватываемые данным стандартом, включают:

- Установление канцерогенных свойств химических веществ, проявляющихся в повышении процента новообразований, в увеличении доли злокачественных новообразований или сокращение времени появления новообразований, по сравнению с параллельными контрольными группами;

- определение времени появления новообразований;

- определение хронической токсичности химических веществ;

- определение органов-мишеней хронической токсичности и канцерогенности,

- описание зависимости доза-реакция;

- определение наименьшего уровня наблюдаемого вредного воздействия (NOAEL) или исходной точки для установления минимальной дозы (BMD);

- экстраполяция канцерогенного влияния на человека при низких уровнях воздействия,

- прогнозирование воздействия хронической токсичности на уровне человеческого организма;

- предоставление данных для проверки гипотез относительно механизма действия [3, 8, 13, 14, 15, 16].

Принцип исследования

Схема исследования состоит из двух параллельных фаз: хронической фазы и фазы канцерогенности (относительно продолжительности см. пункты 34 и 35 соответственно). Тестируемое вещество обычно вводится перорально, хотя возможно также тестирование ингаляторным или дермальным способом. Для хронической фазы тестируемое вещество вводят ежедневно градуированными дозами нескольким группам тестируемых животных, один уровень дозы на группу, как правило, в течение 12-ти месяцев, хотя может быть выбрана большая или меньшая продолжительность в зависимости от нормативных требований (см. пункт 34). Такая продолжительность была выбрана потому, что она достаточна для любых проявлений кумулятивной токсичности, не смешиваясь при этом с проявлениями возрастных изменений. Документ, описывающий цели и методологию эксперимента для проведения исследования и включающий в себя все внесенные в него поправки.План исследования может также включать одно или несколько промежуточных умерщвлений, например, к 3 и 6 месяцам. Для этого можно добавить дополнительные группы животных (см. п. 20). Во время канцерогенной фазы исследуемое вещество вводят ежедневно нескольким группам подопытных животных в течение большей части их жизненного цикла. Животные в обеих фазах тщательно изучаются относительно признаков токсичности и развития опухолевых поражений. Животным, которые умерли или были умерщвлены в ходе тестирования, проводится аутопсия. По окончании исследования выживших животных умерщвляют и также проводят аутопсию.

В оценке и анализе возможной канцерогенности и хронической токсичности химического вещества, до начала проведения исследования, испытательной лабораторией должна быть рассмотрена вся доступная информация по исследуемому веществу с тем, чтобы сфокусировать план исследования для более успешного тестирования его токсикологических свойств и минимизировать использование животных. Информация и рассмотрение способа действия предполагаемого канцерогена [3, 8, 13, 14, 15, 16], особенно важна, так как оптимальный план может отличаться в зависимости от того, известно ли, что вещество является генотоксическим канцерогеном или это только предполагается. Дальнейшие указания по оценке способа действия можно найти в Руководстве № 116 [8].

Данные, которые будут содействовать разработке исследования, включают: идентичность, химическая структура и физико-химические свойства исследуемого вещества; любая информация о механизме действия; результаты любых in vitro и in vivo исследований токсичности, включая тесты на генотоксичность; предполагаемое использование и вероятное воздействие на человеческий организм; доступные данные испытаний (Q)SAR на мутагенность / генотоксичность, канцерогенность и другие токсикологические свойства структурно родственных веществ; имеющиеся токсикокинетические данные (однократная доза, а также кинетика повторной дозы, при наличии) и данные, полученные из других исследований повторного воздействия. Измерение хронической токсичности может быть проведено после получения первоначальных данных о токсичности от 28-дневного и 90-дневного тестирования токсичности повторной дозы. Также полезную информацию дают краткосрочные исследования стимуляции и активизации рака. Поэтапный подход к исследованию на канцерогенность следует рассматривать как часть общей оценки возможного неблагоприятного воздействия на здоровье определенного химического вещества [17, 18, 19, 20].

Статистические методы, наиболее подходящие для анализа результатов, с учетом экспериментального плана и цели, должны быть установлены до начала исследования. Вопросы для рассмотрения включают: должна ли статистика включать в себя корректировку для выживаемости, анализ рисков кумулятивной опухоли относительно продолжительности выживания, анализ времени возникновения опухоли и анализ в случае преждевременного прекращения жизни одной или нескольких групп.

Руководство по соответствующим статистическим исследованиям и ключевые ссылки на международно признанные статистические методы приведены в документе № 116 [8] Руководства, а также в документе № 35 по анализу и оценке исследования хронической токсичности и канцерогенности [21].

При проведении исследования канцерогенности, руководящие принципы и соображения, изложенные в стандарте по вопросам распознавания, оценки и использования клинических симптомов, как гуманных критериев оценки для подопытных животных, используемых в оценке безопасности [22], в частности его пункт 62, всегда должен выполняться. В этом пункте говорится, что "В исследованиях с многократным введением дозы, когда животное демонстрирует прогрессирующие клинические признаки, что приводит к дальнейшему ухудшению состояния, необходимо принять решение умертвлять животное из гуманных соображений или нет. Решение должно учитывать соотношение ценности информации, которая будут получена при дальнейшем использовании этого животного в исследовании, к его общему состоянию. Если будет принято решение оставить животное в исследовании, частота наблюдений должна быть увеличена по мере необходимости. Также, можно, без ущерба для целей тестирования, временно прекратить введение дозы, если это облегчит боль или мучение, или уменьшить тест-дозу».

Подробные правила и обсуждение принципов выбора дозы для исследований хронической токсичности и канцерогенности можно найти в Руководстве № 116 [8], а также в публикациях двух Международных институтов биологических наук [23, 24]. Метод выбора основной дозы зависит от первоначальных целей или задач исследования (п. 6). В выборе подходящего уровня дозы должен быть достигнут баланс между риском отсева с одной стороны и характеристикой ответных реакций на низкие дозы и их значимость - с другой. Это особенно актуально в случае такого комбинированного исследования хронической токсичности и канцерогенности.

Проведение комбинированного исследования хронической токсичности и канцерогенности требует большего анализа в сравнении с исследованиями хронической токсичности(ТС 452) и канцерогенности (TG 451), проводимыми раздельно. Комбинированное исследование дает большую эффективность с точки зрения времени и стоимости и небольшое сокращение подопытных животных, в сравнении с проведением двух отдельных исследований, без ущерба для качества данных, как в хронической фазе, так и в фазе канцерогенности. Тем не менее, необходимо внимательно отнестись к принципам выбора дозы (параграф 11 и 22­26) при проведении комбинированного исследования хронической токсичности и канцерогенности. Раздельные исследования могут являться необходимыми по определенным нормативным требованиям. Дальнейшие указания по разработке исследования комбинированной хронической токсичности и канцерогенности для достижения максимальной эффективности исследования с точки зрения возможности сокращения численности подопытных животных, а также через упорядочение различных экспериментальных методик можно найти в Руководстве № 116.

Описание метода

Животные

Выбор видов

Данный стандарт охватывает главным образом оценку и анализ хронической токсичности и канцерогенности у грызунов (см. п. 2). Использование негрызунов может рассматриваться, если имеющиеся данные позволяют предположить, что они являются более значимыми для прогнозирования воздействия на здоровье человека. Выбор вида должен быть обоснован. Предпочтительным видом грызунов являются крысы, хотя могут использоваться и другие виды, например, мыши. Хотя использование мышей в тестировании на канцерогенность может иметь ограниченное применение [25, 26, 27], по некоторым действующим нормативным документом все же требуется исследование канцерогенности на мышах. Крысы и мыши были выбраны в качестве экспериментальных моделей за их сравнительно короткую продолжительность жизни, широкое применение в фармакологических и токсикологических исследованиях, их восприимчивость к индукции новообразований и доступность этих хорошо исследованных видов. Вследствие этих качеств, имеется большое количество информации об их психологии и патологии. Разработка и проведение исследований хронической токсичности и канцерогенности на видах не-грызунов, когда это необходимо, должны быть основаны на принципах, содержащихся в этом стандарте, а также в ОЭСР TG 409: исследование токсичности повторной дозы, введенной перорально через 90 дней у не-грызунов [7]. Дополнительная информация по выбору видов и рода содержится в Руководстве № 116 [8].

Следует использовать молодых здоровых половозрелых животных лабораторных видов. Комбинированные исследования хронической токсичности и канцерогенности следует проводить на животных того же рода и того же происхождения, что и животные, использовавшиеся в предварительных токсикологических исследованиях небольшой продолжительности, хотя, если известно, что животные этого вида и происхождения имеют проблемы в достижении общепринятых критериев выживаемости для долгосрочных исследований (см. Руководство № 116 [8]), следует рассмотреть использование рода животного, имеющего приемлемый уровень выживаемости для долгосрочного исследования. Женские особи должны быть нерожавшими и не беременны.

Условия содержания и кормления

Животные могут жить отдельно или содержаться в клетках небольшими группами одного пола. Отдельное проживание следует применять только если это научно обосновано [17, 18, 19]. Клетки надо размещать таким образом, чтобы свести к минимуму возможное влияние их местоположения. Температура в помещении с экспериментальными животными должна быть 22 ± 3°С. Хотя относительная влажность должна быть как минимум 30% и не должна превышать 70% (если только не проводится уборка помещения), оптимальная влажность составляет 50%-60%. Свет должен быть искусственным, с последовательностью 12 часов - свет, 12 часов - темнота. Для кормления могут использоваться традиционные лабораторные диеты с неограниченным количеством питьевой воды. Диета должна отвечать всем требованиям питания тестируемого вида. Содержание загрязняющих веществ, которые могут повлиять на результаты исследования, включая остатки пестицидов, стойкие органические загрязнители, фитоэстрогены, тяжелые металлы и микотоксины и т.д., должно быть по возможности минимизировано. Аналитические данные по питанию и уровню загрязняющих веществ в пище должны собираться периодически, как минимум в начале исследования и когда меняется используемая партия, и их следует включать в заключительный отчет. Должны также предоставляться аналитические данные по питьевой воде, используемой в исследовании. На выбор пищи может влиять необходимость введения примеси и удовлетворение пищевых потребностей животных, когда исследуемое вещество вводится в диетический рацион.

Подготовка

Должны использоваться здоровые животные, которые прошли адаптацию в лабораторных условиях как минимум в течение 7 дней и над которыми прежде не ставились эксперименты. В случае с грызунами, введение доз следует начинать как можно раньше, после отлучения от матери и адаптации, желательно, до того как животным исполнится 8 недель. Тестируемые животные должны быть описаны по роду, виду, происхождению, полу, массе тела и возрасту. В начале исследования разница в массе подопытных животных должна быть минимальна и не превышать ± 20% от средней массы всех животных, задействованных в исследовании, отдельно каждого пола. Животные должны быть случайным образом распределены на контрольную и экспериментальные группы. После распределения заметной разницы в средней массы тела между группами каждого пола быть не должно. Если же она имеется, следует, по возможности, повторить распределение. Каждое животное должно быть помечено индивидуальным идентификационным номером, и этот номер следует нанести на перманентной основе, с помощью татуировки, вживления микрочипа или другим подходящим способом.

Основное испытание

Количество и пол животных

Должны использоваться животные обоих полов. Следует использовать такое количество животных, чтобы была возможна статистическая и биологическая оценка. Для грызунов, каждая дозируемая группа (как это предусмотрено в пункте 22) и параллельная ей контрольная группа, предназначенные для канцерогенной фазы исследования, должны содержать не менее 50 животных каждого пола. В зависимости от цели исследования, можно увеличить статистическую значимость основных оценок, разместив животных неравномерно по разным уровням дозы, с более чем 50 животными в низкодозируемых группах, например, для оценки канцерогенного потенциала в малых дозах. Однако следует признать, что умеренное повышение размера группы будет обеспечивать сравнительно небольшое увеличение статистической значимости исследования. Каждая дозируемая группа (как изложено в пункте 22) и параллельная ей контрольная группа, предназначенные для фазы хронической токсичности исследования, должны содержать не менее 10 животных каждого пола, если это грызуны. Следует отметить, что это число меньше, чем в исследовании хронической токсичности TG 452. Интерпретация данных от сокращенного количества животных в группе фазы хронической токсичности, однако, будет подкрепляться большим числом животных канцерогенной фазы исследования. В исследованиях с использованием мышей, дополнительные животные могут быть необходимы в каждой группе фазы хронической токсичности, чтобы провести все необходимые гематологические анализы. Более подробную информацию о статистических методах исследования и выборе уровня доз для максимальной статистической мощности можно найти в руководстве № 116 [8].

Резерв для промежуточных умерщвлений, вспомогательные группы и индикаторные животные.

При исследовании можно сделать резерв для промежуточных умерщвлений, например, в 6 месяцев, для получения данных о развитии токсикологических изменений и данных о механизме воздействия, если это научно обосновано. Когда такая информация уже имеется от предыдущих исследований токсичности повторной дозы, промежуточные умерщвления не могу считаться научно обоснованными. Животные, используемые в фазе исследования хронической токсичности, длящейся, как правило, 12 месяцев (пункт 34), предоставляют данные промежуточного умерщвления для канцерогенной фазы исследования, что позволяет сократить количества животных, используемых в целом.

Также в исследование в фазе хронической токсичности могут включаться вспомогательные группы для отслеживания обратимости любых токсикологических изменений, вызванных химическими веществами при исследовании. Они могут быть ограничены группой с самым высоким уровнем дозы в исследовании и контрольной группой. Если потребуется, в ходе исследования может быть добавлена группа индикаторных животных (обычно, по 5 особей каждого пола) для отслеживания стадии заболевания [31]. Дальнейшие указания по разработке исследования, включающего промежуточные умерщвления, вспомогательных и индикаторных животных, при сведении к минимуму количества животных, используемых в целом, содержатся в Руководстве № 116 [8].

Если вспомогательные животные и / или промежуточные умерщвления включены в схему исследования, количество животных, входящее в каждую из этих групп, как правило, составляет 10 животных каждого пола, а общее количество животных, включенных в исследование, должно быть увеличено на количество животных, которое должно быть умерщвлено до конца исследования. Промежуточное умерщвление и вспомогательные животные, как правило, проходят те же обследования, что и животные фазы

хронической токсичности основного исследования, в том числе контроль массы тела, продуктов питания / потребления воды, измерения гематологической и клинической биохимии и исследования на патологию, хотя также может быть сделан резерв (в группе промежуточного умерщвления) для измерений, ограничивающихся конкретными, ключевыми параметрами, такими как нейротоксичность или иммунотоксичность.

Группы доз и дозировка

Указания по всем аспектам выбора дозы и интервалов между дозами содержится в Руководстве № 116 [8]. Следует использовать, как минимум, три уровня доз и параллельный контроль, для хронической и канцерогенной фаз. Чаще всего уровни дозы основываются на результатах краткосрочных исследований повторной дозы или исследованиях обнаружения диапазона. Необходимо принимать во внимание любые существующие токсикологические и токсикокинетические данные по тестируемому или родственным тестируемому веществам.

В фазе исследования хронической токсичности полное исследование с использованием трех уровней доз не является необходимым, если можно предполагать, что тестирование на одной дозе, эквивалентной не менее 1000 мг/кг массы тела / сутки, вряд ли даст эффекты воздействия. Это предположение должно быть основано на информации из предварительных исследований и из оценки, что токсичность не предполагается, исходя из данных по структурно родственным веществам. Может применятся ограничение 1000 мг/кг массы тела / сутки за исключением тех случаев, когда воздействие на человека указывает на необходимость использования более высокого уровня дозы.

Если нет ограничений по физико-химической природе или биологическому воздействию исследуемого вещества, должна быть выбрана самая высокая доза для определения основных органов- мишеней и токсических эффектов. Однако следует избегать страданий, тяжелой токсичности, болей или смерти. Самый высокий уровень дозы следует выбрать для получения доказательств токсичности, как, например, о токсичности свидетельствуют невозможность набрать массу теля (примерно 10%). Однако, в зависимости от целей исследования (см. п. 6), верхняя доза ниже, чем доза, подтверждающая наличие токсичности, может быть выбрана, например, если доза вызывает токсическое действие, которое, тем не менее, слабо отражается на продолжительности жизни или масса тела.

Уровни доз и интервалы между дозами могут быть выбраны для установления дозозависимого эффекта и, в зависимости от механизма действия испытуемого вещества, NOAEL или других предполагаемых результатов исследования, например, BMD (см. пункт 27). Условия, которые должны быть приняты во внимание при установлении нижней дозы, включают: предполагаемый наклон кривой дозовой зависимости; дозы, при которых могут происходить важные изменения в метаболизме или механизме токсического действия, когда пороговая величина предполагается, или когда предполагается исходная точка для экстраполяции низкой дозы. При проведении комбинированного исследования канцерогенности / хронической токсичности, основная цель заключается в получении информации об оценке рисков канцерогенности, а информация о хронической токсичности, как правило, является вторичной задачей. Это должно быть учтено при выборе доз и интервалов между дозами для исследования.

Избранная разница в уровне доз будет зависеть от целей исследования и параметров тестируемого вещества и не может быть прописана в этом стандарте. Но интервалы доз отличающиеся в 2 - 4 раза оптимальны для установления уровней более низких доз, а при использовании очень больших интервалов (например, диапазон примерно 6-10) между дозировками предпочтительно добавление четвертой тестируемой группы. В целом следует избегать использования диапазона выше 10, а его применение должно быть обосновано.

Как изложено далее в руководстве № 116 [8], вопросы, которые следует учитывать при выборе дозы, включают:

- знания или предположения о нелинейностях или точках перегиба в зависимости «доза-ответ»;

- Фармакокинетическое изучение процессов всасывания, распределения, превращения, выделения исследуемого материала в токсических дозах.токсикокинетика, и диапозон доз, когда имеет место или отсутствует метаболическая индукция, насыщение или нелинейность между внешними и внутренними дозами;

- признаки поражения, влияния или показатели воздействия на основные биологические процессы;

- основные (или предполагаемые) проявления механизма действия, такие как дозы, от которых начинает увеличиваться цитотокичность, нарушается гормональный уровень, подавляется гомеостатический механизм и т.д.

- интервалы кривой «доза-эффект», где необходима чрезвычайно надежная оценка, например, в пределах ожидаемых BMD (исходная точка для установления минимальной дозы) или предполагаемых пороговых величин;

- уровни анализа предполагаемого воздействия на организм человека, особенно в выборе средних и низких доз.

Контрольная группа не должна получать исследуемое вещество или может получать, если она используется при введении тестируемого вещества. За исключением введения исследуемого вещества, с животными из контрольной группы следует обращаться тем же способом, что и с экспериментальными группами. Если используется среда, контрольная группа должна получать ее в максимальном объеме от используемого в экспериментальных группах. Если исследуемое вещество вводится с пищей и тем самым заметно снижает потребление пищи из-за снижения ее вкусовых качеств, будет полезна контрольная, получающая такое же питание и служащая для более адекватного контроля.

Подготовка доз и введение исследуемого вещества

Как правило, исследуемое вещество вводится перорально, через пищу, или питьевую воду, или зонд. Дополнительная информация о способах и методах введения содержится в Руководстве №116 [8]. Способ и метод введения зависят от цели исследования, физических / химических свойств вещества, его биологической усвояемости и основного способа и метода введения в человеческий организм. Должно быть дано обоснование выбранного способа и метода введения. Как правило, в интересах благополучия животных, способ введения с помощью зонда следует выбирать только для тех веществ, которые предполагают данный способ и метод введения человеку (например, лекарственные препараты). Для веществ в составе продуктов питания или загрязняющих химических веществ, включая пестициды, введение обычно осуществляется через пищу или питьевую воду. Однако, для некоторых сценариев воздействия, например, при профессиональном воздействии, введение другими способами может быть более подходящим.

При необходимости, исследуемое вещество растворяется или вносится в соответствующую среду. Следует, при необходимости, уделить внимание следующим характеристикам среды или других вспомогательных веществ: влияние на абсорбцию, распределение, метаболизм или задержку исследуемого вещества; влияние на химические свойства исследуемого вещества, которые могут повысить его токсические свойства; влияние на потребление пищи или воды или обусловленное питанием состояние животных. Рекомендуется, где возможно, использовать в первую очередь водные растворы / суспензии, затем рассматривать раствор эмульсии в масле (например, кукурузное масло), и затем искать возможное использование других сред. Для сред, отличных от воды, должны быть известны их токсические свойства. Должна иметься информация о стабильности исследуемого вещества и однородности растворов с дозой или пищей (при необходимости) в условиях введения (например, пища).

Для веществ, вводимых с пищей или питьевой водой, важно убедиться, что включенное количество исследуемого вещества не препятствует нормальному питанию или потреблению воды. В долгосрочных исследованиях токсичности, использующих введение с пищей, концентрация химического вещества в пище не должна в норме превышать ограничение в 5% от общего количества потребляемой пищи, чтобы избежать пищевого дисбаланса. Когда тестируемое вещество вводится в пищу, могут использоваться или постоянная концентрация в пище (мг/кг или ррт), или постоянный уровень дозы в показателях массы тела животного, подсчитываемая еженедельно. Другое использование должно быть описано.

В случае перорального введения животные получают дозу исследуемого вещества ежедневно (семь дней в неделю), как правило, в течение 12 месяцев (хроническая фаза) или 24 месяцев (фаза канцерогенности). Любой другой режим дозирования, например, пять дней в неделю, должен быть обоснован. В случае нанесения на кожу, животные, как правило, подвергаются воздействию исследуемого вещества в течение не менее 6 часов в сутки, 7 дней в неделю, как указано в TG 410 [12], сроком на 12 месяцев (хроническая фаза) или 24 месяца (фаза канцерогенности). Воздействие ингаляционным способом длится 6 часов в день, 7 раз в неделю, но может быть использовано воздействие 5 часов в день, если это обосновано. Общая длительность воздействия обычно составляет 12 месяцев (хроническая фаза) или 24 месяца (фаза канцерогенности). Если воздействию «только через нос» подвергаются виды грызунов, отличные от крыс, длительность воздействия может быть изменена, чтобы минимизировать видоспецифичные тяжелые недомогания. Воздействие продолжительностью менее 6 часов должно быть обосновано. См. также TG 412 [10].

Когда исследуемое вещество вводится животным через зонд, следует использовать желудочный зонд или подходящую полую трубку в одно и то же время ежедневно. Как правило, одна доза будет вводиться раз в день. Когда состав вызывает раздражение, можно поддерживать ежедневную дозировку путем введения небольших доз (дважды в день). Максимальный объем жидкости, который может быть введен единовременно, зависит от размеров подопытного животного. Объем должен держаться как можно ниже и не превышать 1 мл/100 г массы грызунов. Колебания в тестовом объеме должны быть сведены к минимуму путем корректировки концентрации до обеспечения постоянного объема всех уровней дозы. Потенциально разъедающие или раздражающие вещества являются исключительным случаем. Их необходимо разбавлять, чтобы избежать тяжелых локальных поражений. Тестирований при концентрациях, которые могут разъедать или раздражать желудочно-кишечный тракт, следует избегать.

Продолжительность исследования

Период дозирования и продолжительность хронической фазы этого исследования, как правило, 12 месяцев, хотя метод исследования позволяет сокращать (например, 6 или 9 месяцев) или увеличивать (например, 18 или 24 месяцев) продолжительность исследования, в зависимости от определенных нормативных требований или для конкретных целей. Отклонения от продолжительности воздействия в 12 месяцев должны быть обоснованы, особенно в случае сокращения сроков. Введение доз, отнесенных в этой фазе, должно быть завершено в назначенное время для оценки хронической токсичности и неопухолевых патологий. Вспомогательные группы, включенные для наблюдения за обратимостью любых токсикологических изменений и стимулируемые химическим веществом, следует держать без дозировок не менее 4 недель, но не более одной трети от общего периода исследования после прекращения воздействия.

Продолжительность фазы канцерогенности этого исследования будет, как правило, длиться 24 месяца для грызунов, являясь большей частью нормального жизненного цикла подопытных животных. Более короткие или более длительные исследования могут быть использованы, в зависимости от продолжительности жизни видов животных в исследовании, но должны быть обоснованы. Для определенных видов мышей, например, виды AKR/J, C3H/J или C57BL/6J, продолжительность в 18 месяцев может являться наиболее подходящей. Ниже приводятся некоторые рекомендации по продолжительности, окончании исследования и выживаемости; дальнейшие указания, включая рассмотрение вопроса о приемлемости исследования отрицательной канцерогенности, относящейся к выживаемости в исследовании, приведены в Руководстве № 116 [8]:

- следует рассмотреть прекращение исследования, если число выжи