Наши услуги
О нас
Доклинические исследования
Регламент
Видео доклинические исследования
Клинические исследования
Регламент
Клинические исследования видео
Набор добровольцев
Архив исследований
Набор пациентов
Новости медицины
Интервью
Архив новостей
Контакты
Вакансии
НАВЕРХ

Регламент

III. Анализ испытуемых образцов


50. По завершении полной валидации аналитической методики приступают к анализу испытуемых образцов. До начала анализа испытуемых образцов необходимо провести проверку пригодности биоаналитической методики.

51. С целью обеспечения приемлемости аналитического цикла пробоподготовку испытуемых образцов, образцов для КК и градуировочных растворов необходимо осуществлять в соответствии с валидированной аналитической методикой.

1. Аналитический цикл

52. Аналитический цикл состоит из холостого образца (подвергнутого обработке биологического образца, не содержащего анализируемого вещества или ВС) и нулевого образца (подвергнутого обработке биологического образца, содержащего ВС), градуировочных растворов не менее чем в 6 концентрациях, образцов для КК не менее чем в 3 концентрациях (нижний, средний и верхний уровни) в 2 повторностях (или не менее 5 % от количества испытуемых образцов в зависимости от того, что больше) и испытуемых образцов, подлежащих анализу. Если номинальные концентрации исходных растворов не установлены, градуировочные растворы и образцы для КК необходимо готовить отдельно, используя разные приготовленные исходные растворы. Все образцы (градуировочные растворы, образцы для КК и испытуемые образцы) подлежат пробоподготовке как единая серия образцов в порядке, в котором они должны анализироваться. Единая серия представляет собой образцы, подлежащие пробоподготовке в одно и то же время, то есть последовательной непрерывной обработке одним и тем же аналитиком с использованием одинаковых реактивов в сходных условиях. Следует избегать анализа раздельно приготовленных образцов в качестве нескольких серий в одном аналитическом цикле. Если этого избежать не удается (например, вследствие ограничений по стабильности при пробоподготовке) то каждая серия должна включать в себя образцы для КК как минимум 3 уровней концентрации (нижнего, среднего и верхнего). В стандартной операционной процедуре (далее – СОП) или рабочих документах по исследованию необходимо заранее установить критерии приемлемости для всего аналитического цикла и его отдельных серий.

53. В целях снижения вариабельности результатов анализ всех образцов о т 1 с убъекта в и сследованиях биоэквивалентности рекомендуется осуществлять в рамках 1 аналитического цикла. Образцы для КК необходимо распределить по циклу таким образом, чтобы доказать правильность и прецизионность для всего цикла.

2. Критерии приемлемости аналитического цикла

54. В протоколе, плане исследования или в СОП необходимо установить критерии приемлемости или неприемлемости аналитического цикла. Если весь цикл состоит из нескольких серий, критерии приемлемости должны распространяться на весь цикл и (или) на каждую с ерию в о тдельности. Ц икл м ожет б ыть п риемлемым несмотря на неприемлемость серии в связи с несоблюдением критериев.

55. Необходимо установить следующие критерии приемлемости
аналитического цикла:
а) экспериментально рассчитанные концентрации градуировочных растворов должны находиться в пределах ± 15 % от номинальных значений (за исключением НПКО, для которых эти значения могут находиться в пределах ± 20 %). Этому критерию должны соответствовать не менее 75 % градуировочных растворов, как минимум для 6 различных концентраций. Если результат для градуировочного раствора не соответствует этим критериям, этот результат должен быть исключен, а градуировочная кривая должна быть пересчитана без учета этого результата (повторный регрессионный анализ). Если отклоненный результат относится к градуировочному раствору с уровнем НПКО, то для такого аналитического цикла в качестве НПКО будет служить следующий наименьший приемлемый градуировочный раствор из диапазона линейности. Если результат для градуировочного раствора с максимальной концентрацией неприемлем, то для такого аналитического цикла в качестве ВПКО будет служить следующий наибольший приемлемый градуировочный раствор из диапазона линейности. Пересчитанный аналитический диапазон должен охватывать все образцы для КК (нижнего, среднего и верхнего уровня);
б) значения правильности образцов для КК должны лежать в пределах ± 15 % от номинальных значений. Этому критерию должны соответствовать не менее 67 % о бразцов д ля К К и н е м енее 5 0% образцов для каждой концентрации. Если эти критерии не соблюдаются, аналитический цикл необходимо забраковать, а исследуемые образцы подвергнуть повторной пробоподготовке и анализу. При одновременном определении нескольких анализируемых веществ каждому из них должна соответствовать отдельная градуировочная кривая. Если аналитический цикл по одному из анализируемых веществ является приемлемым, но неприемлемым по другому, допускается использовать данные по концентрации приемлемого анализируемого вещества, однако для определения концентрации отклоненного анализируемого вещества образцы необходимо подвергнуть повторной пробоподготовке и анализу.

56. Если при повторном использовании градуировочных растворов один из них – НПКО или ВПКО – оказывается неприемлемым, аналитический диапазон методики не меняется.

57. Для каждой концентрации образцов для КК необходимо рассчитать средние значения правильности и прецизионности всех принятых циклов и включить их в аналитический отчет. Если средние значения правильности и значения прецизионности превышают 15 %, необходимо провести дополнительное расследование с целью объяснения таких отклонений. Подобные результаты при исследованиях биоэквивалентности могут привести к неприемлемости данных.

3. Аналитический диапазон (Совокупность операций, устанавливающих соотношение между значением величины, полученной используемым прибором и соответствующим значением величины, определяемой с помощью эталона.Calibration range)

58. Если до начала анализа испытуемых образцов известно или ожидается, что диапазон концентраций анализируемого вещества в испытуемых образцах будет узким, то в целях надежного расчета концентраций в испытуемых образцах рекомендуется либо сузить аналитический диапазон и адаптировать концентрации образцов для КК к нему, либо включить новые образцы для КК с соответствующими концентрациями.

59. Если узкого диапазона результатов анализа не ожидается, но он наблюдается после начала анализа образцов, рекомендуется остановить анализ и либо сузить установленный аналитический диапазон с пересмотром существующих концентраций образцов для КК, либо перед возобновлением анализа испытуемых образцов включить в аналитический диапазон образцы для КК с дополнительными концентрациями. Повторный анализ образцов, проанализированных до оптимизации аналитического диапазона или концентраций образцов для КК, не требуется.

60. Правило, указанное в пункте 59 настоящих Требований также применимо, если выясняется, что большое количество концентраций анализируемого вещества в испытуемых образцах превышает верхнюю границу определяемых концентраций. В этом случае по возможности необходимо расширить аналитический диапазон и включить дополнительные образцы для КК или изменить их концентрацию.

61. В диапазон концентраций, установленный для испытуемых образцов, должны входить не менее 2 концентраций образцов для КК. Если аналитический диапазон изменяется, в целях расчета функции отклика и подтверждения правильности и прецизионности биоаналитическая методика подлежит повторной (частичной) валидации.

4. Повторный анализ испытуемых образцов

62. До начала анализа образцов в протоколе валидации, плане анализа или СОП необходимо установить возможные причины повторного анализа испытуемых образцов и критерии выбора значений, подлежащих включению в аналитический отчет. В отчете об исследовании необходимо обосновать количество образцов (и их долю от общего количества), подвергшихся повторному анализу.

63. Повторный анализ испытуемых образцов, может проводиться в том числе по следующим причинам:
а) забраковка аналитического цикла вследствие невыполнения критериев приемлемости в отношении правильности градуировочных растворов и (или) образцов для КК;
б)аналитический сигнал ВС значительно отличается от сигнала, полученного для градуировочных растворов и образцов для КК (если такие критерии заранее установлены в СОП);
в) ошибки при введении образцов или неисправность аналитического оборудования;
г) наличие циклов, в которых: градуировочный образец с нижним уровнем был исключен из градуировочной кривой; рассчитанные концентрации превышают верхнюю границу определяемых концентраций; рассчитанные концентрации находятся ниже НПКО для данного цикла, что привело к увеличению его НПКО по сравнению с другими циклами;
д)обнаружение анализируемого вещества в биологическом образце, полученном до приема (введения) лекарственного препарата, или в холостых образцах на уровнях НПКО;
е) несоответствие критериям приемлемости при проверке пригодности хроматографического анализа.

64. Повторный анализ испытуемых образцов по фармакокинетическим причинам в исследованиях биоэквивалентности является, как правило, неприемлемым, поскольку он может повлиять на результаты исследования и исказить их. В этом случае повторный анализ можно рассматривать как часть лабораторного расследования с целью выявления возможных причин аномальных результатов и предотвращения возникновения подобных проблем в будущем.

65. Если повторный анализ проведен вследствие обнаружения анализируемого вещества в биологических образцах полученных до приема (введения) лекарственного препарата или по фармакокинетическим причинам, необходимо описать образцы, подвергнутые повторному анализу, и представить данные о начальных значениях, причинах повторного анализа, значениях, полученных в ходе повторного анализа и указать принятые в итоге значения и обоснования приемлемости.

66. Если в ходе валидации доказана удовлетворительная прецизионность для повторной инжекции и стабильность подготовленных образцов в устройстве для автоматического ввода проб, при неисправности оборудования допускается повторная инжекция образцов. Повторная инжекция всего аналитического цикла или отдельных образцов градуировочных растворов или образцов для КК в силу элементарного брака при градуировке либо образцов для КК без какой-либо установленной аналитической причины недопустима.

67. Безопасность субъектов исследования должна превалировать над любыми другими аспектами исследования. Поэтому при ее обеспечении могут возникнуть иные обстоятельства, требующие повторной пробоподготовки и (или) повторного анализа отдельных испытуемых образцов (например, если обнаружены неожиданные или резко выделяющиеся результаты, которые могут повлиять на безопасность пациента).

5. Интегрирование (обработка хроматограмм)

68. В СОП необходимо описать интегрирование и повторное интегрирование хроматограмм. В аналитическом отчете необходимо объяснить все отклонения в выполнении процедур от данного СОП. Параметры интегрирования хроматограмм и при повторном интегрировании начальные и конечные данные интегрирования необходимо вносить в документы лаборатории и представлять по
запросу.